Spas ji bo serdana Nature.com.Guhertoya geroka ku hûn bikar tînin piştgirîya CSS-ê sînordar e.Ji bo ezmûna çêtirîn, em pêşniyar dikin ku hûn gerokek nûvekirî bikar bînin (an jî Moda Lihevhatinê ya di Internet Explorer de neçalak bikin).Di vê navberê de, ji bo misogerkirina piştgirîya domdar, em ê malperê bê şêwaz û JavaScript pêşkêş bikin.
Toxoplasma gondii parazîtek protozoan a navhucreyî ye ku mîkro hawîrdora mêvandarê vegirtî modul dike û tê zanîn ku bi bûyera mezinbûna tumora mêjî re têkildar e.Di vê lêkolînê de, em hîpotez dikin ku exosomal miRNA-21 ji enfeksiyona Toxoplasma mezinbûna tumora mêjî pêşve dike.Exosomên ji mîkroglia BV2-ê vegirtî bi Toxoplasma ve hatî destnîşan kirin û hundurînkirina hucreyên glioma U87 hate pejirandin.Profîlên îfadeya mîkroRNAya exosomal bi karanîna rêzikên mîkroRNA û microRNA-21A-5p yên ku bi Toxoplasma gondii û dabeşkirina tumorê ve girêdayî ne hatine analîz kirin.Me di heman demê de asta mRNA ya genên bi tumor-girêdayî di hucreyên glioma U87 de bi guheztina astên miR-21 di exozoman de û bandora exozoman li ser belavbûna hucreya glioma U87 ya mirovî lêkolîn kir.Di exozomên hucreyên glioma yên U87 de ku bi Toxoplasma gondii vegirtî ne, îfadeya microRNA-21 zêde dibe û çalakiya genên antîtumor (FoxO1, PTEN, û PDCD4) kêm dibe.Egzozomên BV2-derketî yên bi Toxoplasma vegirtî bûne sedema belavbûna şaneyên glioma U87.Exosom mezinbûna hucreyên U87 di modela tîmora mişkê de çêdike.Em pêşniyar dikin ku zêdekirina miR-21 exosomal di mîkroglia BV2-ê vegirtî de bi Toxoplasma ve dibe ku wekî pêşengek mezinbûna hucreyê di hucreyên glioma U87 de bi kêmkirina genên antîtumor rolek girîng bilîze.
Tê texmîn kirin ku zêdetirî 18.1 mîlyon bûyerên penceşêrê yên pêşkeftî di sala 2018-an de li çaraliyê cîhanê hatine teşhîs kirin, ku her sal nêzî 297,000 tumorên pergala nerva navendî têne teşhîs kirin (1.6% ji hemî tumoran)1.Lêkolînên berê destnîşan kir ku faktorên xetereyê ji bo pêşkeftina tîmorên mêjî yên mirovî hilberên cûda yên kîmyewî, dîroka malbatê, û tîrêjên ionîzasyonê yên ji alavên dermankirin û tespîtkirinê yên serî hene.Lêbelê, sedema rastîn a van nexweşiyan nayê zanîn.Nêzîkî 20% ji hemî penceşêrên li çaraliyê cîhanê ji ber sedemên vegirtinê, di nav de vîrus, bakterî û parazîtan hene3,4.Patojenên enfeksiyonê mekanîzmayên genetîkî yên hucreya mêvandar, wekî tamîrkirina ADN û çerxa şaneyê xera dikin, û dikarin bibin sedema iltîhaba kronîk û zirarê bide pergala parastinê5.
Ajanên enfeksiyonê yên ku bi kansera mirovî ve girêdayî ne pathogenên viral ên herî gelemperî ne, di nav de papillomavirusên mirovî û vîrusên hepatît B û C.Parazît jî dikarin di pêşkeftina kansera mirovî de rolek potansiyel bilîzin.Çend cureyên parazîtan, bi navê Schistosoma, Opishorchis viverrini, O. felineus, Clonorchis sinensis û Hymenolepis nana, di cûrbecûr cûrbecûr penceşêra mirovî de 6,7,8 hatine têkildar kirin.
Toxoplasma gondii protozoanek hundurîn e ku mîkro hawîrdora hucreyên mêvandar ên vegirtî bi rê ve dibe.Tê texmîn kirin ku ev parazît bi qasî 30% ji nifûsa cîhanê vegirtî ye, ku tevahiya nifûsê dixe xeterê9,10.Toxoplasma gondii dikare organên girîng, di nav de pergala demarî ya navendî (CNS) vegire û bibe sedema nexweşiyên ciddî yên wekî meningitis û encephalitis, nemaze di nexweşên immunocompromised9.Lêbelê, Toxoplasma gondii di heman demê de dikare hawîrdora mêvandarê vegirtî biguhezîne bi modulkirina mezinbûna hucreyê û bersivên xweparastinê yên di mirovên belengaz de, ku bibe sedema domandina enfeksiyonek kronîk a asîmptomatîkî9,11.Balkêş e, ku ji ber pêwendiya di navbera belavbûna T. gondii û bûyera tîmora mêjî de, hin rapor destnîşan dikin ku guhertinên hawîrdorê yên mêvandar ên in vivo yên ji ber enfeksiyona T. gondii ya kronîk dişibin mîkro hawîrdora tumor.
Egzozom wekî danûstendinên navhucreyî têne zanîn ku naveroka biyolojîkî, tevî proteîn û asîdên nukleîk, ji şaneyên cîran radest dikin16,17.Exosomes dikarin bandorê li pêvajoyên biyolojîkî yên bi tumor-ê yên wekî antî-apoptosis, angiogenesis, û metastasis di mîkro-hawirdora tumor de bikin.Bi taybetî, miRNAs (miRNAs), RNAyên piçûk ên ne-kodkirî yên bi dirêjahiya 22 nukleotîdan, rêgezên genê yên piştî-transkrîpsiyonê yên girîng in ku ji% 30-ê mRNA-ya mirovî bi navgîniya kompleksa bêdengkirinê ya ku ji hêla miRNA ve hatî çêkirin (miRISC) kontrol dikin.Toxoplasma gondii dikare pêvajoyên biyolojîkî bi kontrolkirina îfadeya miRNA di mêvandarên vegirtî de têk bibe.MiRNAyên mêvandar ji bo birêkûpêkkirina pêvajoyên biyolojîkî yên mêvandar îşaretên girîng dihewîne da ku bigihîje stratejiya zindîbûna parazîtê.Ji ber vê yekê, lêkolîna guhertinên di profîla miRNA ya mêvandar de li ser enfeksiyona bi T. gondii dikare ji me re bibe alîkar ku têkiliya di navbera mêvandar û T. gondii de zelaltir fam bikin.Bi rastî, Thirugnanam et al.15 pêşniyar kir ku T. gondii kanserojeneya mêjî bi guheztina îfadeya wê ya li ser miRNA-yên mêvandar ên taybetî yên ku bi mezinbûna tîmorê ve girêdayî ne pêşve dike û dît ku T. gondii dikare di heywanên ceribandinê de bibe sedema gliomas.
Vê lêkolînê balê dikişîne ser guheztina miR-21 exosomal di mîkroglia mêvandar de ku bi Toxoplasma BV2 vegirtî ye.Me di mezinbûna hucreyên glioma yên U87 de ji ber ragirtina di nucleus FoxO1/p27 de, ku hedefa miR-21-a zêde diyarkirî ye, rolek muhtemel a miR-21 a exosomal a guhezbar dît.
Exosomên ku ji BV2 hatine wergirtin bi karanîna santrîfujasyona cihêreng hatine wergirtin û bi awayên cûrbecûr hatine pejirandin da ku pêşî li gemarîbûna bi hêmanên hucreyî an vezikên din bigirin.Elektroforeza gel a SDS-polyacrylamide (SDS-PAGE) di navbera proteînên ku ji hucreyên BV2 û exozoman hatine derxistin de qalibên cihêreng nîşan da (Wêne 1A), û nimûne ji bo hebûna Alix, ku ji hêla blota rojavayî ya nîşangirên proteîna exosomal ve hatî analîz kirin, hatin nirxandin.Etîketkirina Alix di proteînên exozomê de lê ne di proteînên lîzatê yên hucreya BV2 de hate dîtin (Hêjîra 1B).Wekî din, RNA-ya paqijkirî ya ji exozomên ku ji BV2 hatî derxistin bi karanîna biyoanalyzerek hate analîz kirin.18S û 28S binerdeyên rîbozomê kêm kêm di şêwaza koçberiya RNA ya exosomal de hatine dîtin, ku paqijiya pêbawer destnîşan dike (Wêne 1C).Di dawiyê de, mîkroskopiya elektronîkî ya veguheztinê destnîşan kir ku exozomên çavdêrîkirî bi qasî 60-150 nm mezinahî ne û xwedî avahiyek mîna kûpek tîpîk a morfolojiya exozomê bûn (Wêne. 1D).
Taybetmendiya exozomên ku ji şaneyên BV2 têne derxistin.(A) Rûpelê daneyên ewlehiyê.Proteîn ji şaneyên BV2 an exozomên ku ji BV2 hatine veqetandin.Nimûneyên proteînê di navbera hucre û exozoman de cûda dibin.(B) Analîza blota rojavayî ya nîşankerek exosomal (Alix).(C) Nirxandina RNA-ya paqijkirî ya ji hucreyên BV2 û exozomên BV2 yên jêgirtî bi karanîna biyoanalîzatorê.Ji ber vê yekê, 18S û 28S binerdeyên rîbozomî yên di hucreyên BV2 de kêm kêm di ARNya exosomal de hatin dîtin.(D) Mîkroskopiya elektronê ya veguheztinê destnîşan kir ku exozomên ku ji şaneyên BV2 hatine veqetandin bi 2% uranyl acetate neyînî hatine reng kirin.Exosom bi qasî 60-150 nm mezinahî û qedeh in (Song and Jung, daneyên neçapkirî).
Navxweyîkirina hucreyî ya exozomên BV2-derketî di nav hucreyên glioma yên mirovî yên U87 de bi karanîna mîkroskopa konfokal hate dîtin.Exosomên nîşankirî yên PKH26 di nav sîtoplazmaya hucreyên U87 de cih digirin.Navokî bi DAPI (Hêjî. 2A) hatin boyaxkirin, ku nîşan dide ku exozomên ji BV2-yê derketine dikarin ji hêla hucreyên mêvandar ve werin hundurîn û bandorê li hawîrdora hucreyên wergir bikin.
Navxweyîkirina exozomên BV2-derketî di nav şaneyên glioma U87 de û exozomên BV2-derketî yên bi Toxoplasma RH vegirtî bûne sedema belavbûna şaneyên glioma U87.(A) Exosomên ku ji hêla hucreyên U87 ve têne dorpêç kirin bi mîkroskopiya konfokal têne pîvandin.Hucreyên glioma U87 bi exozomên ku bi PKH26 (sor) hatine nîşankirin an jî bê kontrol 24 demjimêran hatin inkubasyon kirin.Navok bi DAPI (şîn) hatin boyaxkirin û dûv re di bin mîkroskopa konfokal de (barê pîvanê: 10 μm, x 3000) hatin dîtin.(B) Zêdebûna hucreya glioma U87 bi ceribandina pirbûna hucreyê hate destnîşankirin.Hucreyên glioma U87 ji bo dema destnîşankirî bi exozoman hatin derman kirin. *P < 0,05 bi testa T Student hat bidestxistin. *P < 0,05 bi testa T Student hat bidestxistin. *P < 0,05 bi t-kriteriyu Stьyudenta. *P <0,05 ji hêla T-testa Xwendekarê ve. *P < 0,05 通过学生t 检验获得。 *P <0,05 * P < 0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P < 0,05 bi karanîna T-testa Xwendekarê hatî wergirtin.
Piştî piştrastkirina hundurînkirina exozomên BV2-derketî di nav hucreyên glioma U87 de, me ceribandinên belavbûna hucreyê pêk anî da ku rola exozomên jêderkî yên BV2-ê yên Toxoplasma-yê di pêşkeftina hucreyên glioma mirovan de lêkolîn bikin.Dermankirina hucreyên U87 bi eksozomên ji şaneyên BV2 yên bi T. gondii vegirtî nîşan da ku exozomên ji BV2-ê vegirtî yên T. gondii li gorî kontrolê bi girîngî zêde dibe sedema belavbûna şaneyên U87 (Hêjî. 2B).
Wekî din, mezinbûna hucreyên U118 bi heman encamên U87 re bû, ji ber ku exozomên teşwîqkirî yên Toxoplasma bûne sedema astên herî bilind ên belavbûnê (daneyên ku nayên xuyang kirin).Li ser bingeha van daneyan, em dikarin destnîşan bikin ku exozomên vegirtî yên Toxoplasma-ya BV2-ê di belavbûna hucreya glioma de rolek girîng dileyzin.
Ji bo vekolîna bandora egzozomên BV2-vegirtî yên Toxoplasma-yê li ser pêşkeftina tumorê, me hucreyên glioma U87 li mişkên tazî ji bo modelek xenograftê derzî kirin û exosomeyên ji BV2-ê an jî eksozomên ji BV2-ê-RH-vegirtî derzî kirin.Piştî ku tîmor piştî 1 hefte diyar bûn, her komek ceribandinê ya ji 5 mişkan pêk tê li gorî mezinahiya tumorê hate dabeş kirin da ku heman xala destpêkê were destnîşankirin, û mezinahiya tumor 22 rojan hate pîvandin.
Di mêşên bi modela xenograftê ya U87 de, di roja 22-an de di koma exosome ya bi RH-vegirtî ya BV2-ê de mezinahî û giraniya tîmorê bi girîngî mezintir hate dîtin (Wêne. 3A,B).Ji hêla din ve, di mezinahiya tumorê de di navbera koma exosome ya BV2-derketî û koma kontrolê de piştî dermankirina exosome de cûdahiyek girîng tune.Wekî din, mêşên ku bi şaneyên glioma û egzozoman hatine derzîkirin bi dîtbarî mezintirîn qebareya tumorê di koma exozomên ji BV2-ê vegirtî yên RH-ê de nîşan didin (Hêl. 3C).Van encaman destnîşan dikin ku exozomên vegirtî yên Toxoplasma-yê yên BV2-ê di modelek tumora mişkê de mezinbûna glioma çêdike.
Oncogenesis (AC) ya exozomên BV2-derketî di modela mişkek xenograftê ya U87 de.Mezinahiya tumorê (A) û giraniya (B) di mêşên tazî yên BALB/c yên ku bi eksozomên bi RH-vegirtî yên ji BV2-ê hatine derman kirin de bi girîngî zêde bûn.Mişkên tazî yên BALB/c (C) bi 1 x 107 şaneyên U87 yên ku di tevlêbûna Matrigelê de hatine sekinandin, bi binê çermê hatine derzî kirin.Şeş roj piştî derzîlêdanê, 100 μg exozomên BV2-derketî li mişkan hatin derman kirin.Mezinahî û giraniya tumorê bi rêzdarî di rojên destnîşankirî û piştî qurbankirinê de hate pîvandin. *P <0,05. *P <0,05. *Р < 0,05. *P <0,05. *P <0,05. *P <0,05. *Р < 0,05. *P <0,05.
Daneyan destnîşan kir ku 37 miRNAs (16 zêde û 21 kêmbûyî) yên ku bi berevaniyê an pêşveçûna tumorê re têkildar in piştî enfeksiyonê bi çenga Toxoplasma RH (Hêjî. 4A) di mîkroglia de bi girîngî hatine guhertin.Asta vegotina têkildar a miR-21 di nav miRNAyên guhezbar de ji hêla RT-PCR-ya rast-ê ve di exozomên ku ji BV2-ê têne derxistin, exozomên ku bi hucreyên BV2 û U87 têne derman kirin ve hatî pejirandin.Îfadeya miR-21 zêdebûnek girîng di exozomên ji şaneyên BV2 yên bi Toxoplasma gondii (çenga RH) vegirtî nîşan da (Wêne. 4B).Asta vegotina têkildar a miR-21 di hucreyên BV2 û U87 de piştî girtina exozomên guhezbar zêde bû (Wêne. 4B).Asta nisbî ya îfadeya miR-21 di tevnên mêjî yên nexweşên tumor û mêşên ku bi Toxoplasma gondii (çenga ME49) vegirtî ne, bi rêzê ji yên kontrolê bilindtir bû (Hêjîra 4C).Van encaman bi cûdahiyên di navbera astên vegotinê yên mîkroRNAyên pêşbînîkirî û pejirandî de di vitro û in vivo de têkildar in.
Guhertinên di vegotina miP-21a-5p exosomal de li mîkroglia ku bi Toxoplasma gondii (RH) vegirtî ye.(A) Guhertinên girîng ên di siRNA de ku bi berevanîbûn an pêşkeftina tumor re li dû enfeksiyona T. gondii RH ve girêdayî ye, nîşan dide.(B) Asta vegotinê ya têkildar a miR-21 ji hêla RT-PCR-ya rast-ê ve di exozomên BV2-derketî, exozomên bi BV2-dermankirî, û hucreyên U87 de hate tespît kirin.(C) Astên derbirînê yên miR-21 yên têkildar di tevnên mêjî yên nexweşên tumor (N=3) û mêşên ku bi Toxoplasma gondii (çenga ME49) vegirtî hatine dîtin (N=3). *P < 0,05 bi testa T Student hat bidestxistin. *P < 0,05 bi testa T Student hat bidestxistin. *P < 0,05 было получено со помощью t-критерия Стьюдента. *P < 0,05 bi testa Student t-yê hat bidestxistin. *P < 0,05 通过学生t 检验获得。 *P <0,05 * P <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P < 0,05 bi karanîna T-testa Xwendekarê hatî wergirtin.
Exosomên ji hucreyên BV2 yên bi RH vegirtî bûne sedema mezinbûna gliomas in vivo û in vitro (Wêne. 2, 3).Ji bo tespîtkirina mRNA-yên têkildar, me astên mRNA yên genên hedefa antîtumorî, qutiya pêşûyê O1 (FoxO1), PTEN, û mirina hucreya bernamekirî 4 (PDCD4) di şaneyên U87 de yên ku bi exozomên ji BV2 an RH BV2 vegirtî vegirtî lêkolîn kirin.Analîzên biyoinformatics destnîşan kir ku gelek genên girêdayî tumor, di nav de genên FoxO1, PTEN, û PDCD4, xwedî cihên girêdanê yên miR-2121,22 hene.Asta mRNA ya genên hedefa antîtumorê di eksozomên BV2-dervekirî yên RH-vegirtî de li gorî exosomeyên BV2-derketî kêm bûn (Hêjîrêka 5A).FoxO1 di exozomên BV2-derketî yên RH-vegirtî de li gorî exosomeyên ji BV2-ê derketin asta proteînê kêm nîşan da (Wêne 5B).Li ser bingeha van encaman, em dikarin piştrast bikin ku exozomên ji BV2-ê vegirtî yên RH-ê têne derxistin genên antî-onkojenîk kêm dikin, û rola wan di mezinbûna tumor de diparêzin.
Egzozomên ji BV2-ê vegirtî yên Toxoplasma RH-ê vegirtina genên antîtumor di şaneyên glioma U87 de ji hêla eksozomên ji BV2-ê vegirtî yên Toxoplasma RH-ê vegirtî vedigirin.(A) PCR-ya rastîn a FoxO1, PTEN û PDCD4 di egzozomên ku ji T. gondii RH-vegirtî BV2-ê vegirtî li gorî exozomên PBS-ê têne derxistin.β-actin mRNA wekî kontrolek hate bikar anîn.(B) Gotina FoxO1 ji hêla Western blotting ve hate destnîşankirin û daneyên densîtometrî bi karanîna bernameya ImageJ-ê bi îstatîstîkî hate nirxandin. *P < 0,05 bi testa T Student hat bidestxistin. *P < 0,05 bi testa T Student hat bidestxistin. *P < 0,05 было получено со помощью t-критерия Стьюдента. *P < 0,05 bi testa Student t-yê hat bidestxistin. *P < 0,05 通过学生t 检验获得。 *P <0,05 * P <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P < 0,05 bi karanîna T-testa Xwendekarê hatî wergirtin.
Ji bo têgihîştina bandora miP-21 di exozoman de li ser rêziknameya genê-girêdayî tumor, hucreyên U87 bi înhîbîtorê miP-21 bi karanîna Lipofectamine 2000 ve hatin veguheztin û şaneyên 24 demjimêran piştî veguheztinê hatin berhev kirin.Asta îfadeya FoxO1 û p27 di hucreyên ku bi frendêrên miR-21 ve hatî veguheztin bi şaneyên ku bi eksozomên BV2-derketî yên ku bi karanîna qRT-PCR ve hatî derman kirin re hate berhev kirin (Wêne. 6A,B).Veguheztina înhîbîtorê miR-21 di nav hucreyên U87 de bi girîngî îfadeya FoxO1 û p27 kêm kir (WÊN 6).
MiP-21-a eksosomal BV2-vegirtî ya RH-ê vegirtî, îfadeya FoxO1/p27 di hucreyên glioma U87 de guhezand.Hucreyên U87 bi înhîbîtorê miP-21 bi karanîna Lipofectamine 2000 ve hatin veguheztin û şaneyên 24 demjimêran piştî veguheztinê hatin berhev kirin.Asta îfadeya FoxO1 û p27 di hucreyên ku bi frendêrên miR-21 ve hatî veguheztin bi astên di hucreyên ku bi exozomên BV2-derketî yên ku bi karanîna qRT-PCR (A, B) ve hatî derman kirin re hate berhev kirin.
Ji bo ku ji berteka xweparastinê ya mazûvan birevin, parazîta Toxoplasma vediguhere kîstek tevnê.Ew tevne cûrbecûr, di nav de mêjî, dil, û masûlkeyên skeletal, di seranserê jiyana mêvandar de parazît dikin û berteka xweparastinê ya mêvandar modul dikin.Wekî din, ew dikarin çerxa hucreyê û apoptoza hucreyên mêvandar birêkûpêk bikin, belavbûna wan pêşve bibin14,24.Toxoplasma gondii bi giranî hucreyên dendrîtîk ên mêvandar, neutrofîl û rêza monosît/makrofage, tevî mîkroglia mêjî, vedigire.Toxoplasma gondii ciyawaziya makrofajên fenotîpa M2 çêdike, bandorê li başbûna birînan dike piştî enfeksiyona pathogen, û di heman demê de bi hypervascularization û fibroza granulomatoz re têkildar e.Dibe ku ev pathogenesiza behreyî ya enfeksiyona Toxoplasma bi nîşankerên ku bi pêşveçûna tumorê ve girêdayî ne ve girêdayî be.Jîngeha dijmin a ku ji hêla Toxoplasma ve hatî rêve kirin dibe ku dişibihe pêşkansera têkildar.Ji ber vê yekê, meriv dikare were texmîn kirin ku enfeksiyona Toxoplasma divê beşdarî pêşveçûna tumorên mêjî bibe.Bi rastî, rêjeyên bilind ên enfeksiyona Toxoplasma di seruma nexweşên bi tumorên mêjî yên cihêreng de hatine ragihandin.Wekî din, Toxoplasma gondii dibe ku bandorkerek kanserojenek din be û bi hevrêzî tevbigere da ku alîkariya kanserojenên enfeksiyonê yên din bike ku tumorên mêjî pêşve bibin.Di vî warî de, hêjayî gotinê ye ku P. falciparum û Vîrûsa Epstein-Barr bi hevrêzî beşdarî avakirina lîmfoma Burkitt dibin.
Di warê lêkolîna penceşêrê de rola exosomes wekî rêgezker bi berfirehî hatiye lêkolîn kirin.Lêbelê, rola exozomên di navbera parazît û mêvandarên vegirtî de kêm tê fêm kirin.Heya nuha, rêgezên cihêreng, tevî proteînên veşartî, pêvajoyên biyolojîkî yên ku bi wan parazîtên protozoan li dijî êrîşa mêvandar li ber xwe didin û enfeksiyonê berdewam dikin rave kirine.Di van demên dawî de, têgehek mezin heye ku mîkrovesîkulên bi protozoan ve girêdayî û mîkroRNAyên wan bi hucreyên mêvandar re têkilî daynin da ku ji bo saxbûna wan jîngehek xweş biafirînin.Ji ber vê yekê, lêkolînên din hewce ne ku têkiliya di navbera miRNAyên exosomal ên guheztin û belavbûna hucreya glioma de kifş bikin.Guherîna mîkroRNA (genên komê miR-30c-1, miR-125b-2, miR-23b-27b-24-1 û miR-17-92) di makrofajên mirovî yên bi toksoplazma vegirtî de bi promotorê STAT3 ve girêdide, tê rêkûpêk kirin û antî çêdike. -apoptosis di bersiva enfeksiyona Toxoplasma gondii de 29 .Enfeksiyona toxoplasma îfadeya miR-17-5p û miR-106b-5p zêde dike, ku bi gelek nexweşiyên hîperproliferatîf re têkildar in 30 .Van daneyan destnîşan dikin ku miRNAyên mêvandar ên ku ji hêla enfeksiyona Toxoplasma ve têne rêve kirin molekulên girîng in ji bo saxbûna parazîtan û pathogenesis di behreya biyolojîkî ya mêvandar de.
MiRNA-yên guheztin dikarin di dema destpêkirin û pêşkeftina şaneyên xirab de bandorê li cûrbecûr behreyê bikin, di nav de gliomas: xweragiriya nîşanên mezinbûnê, nehesasiya ji nîşaneyên astengkirina mezinbûnê, dûrketina apoptozê, potansiyela dubareker a bêsînor, angiogenesis, dagirkirin û metastaz, û iltîhaba.Di glioma de, miRNA-yên guhezbar di gelek lêkolînên profîla îfadekirinê de hatine nas kirin.
Di lêkolîna heyî de, me astên bilind ên îfadeya miRNA-21 di hucreyên mêvandar ên vegirtî yên toxoplasma de piştrast kir.miR-21 wekî yek ji mîkroRNAyên ku pir caran pir zêde tê xuyang kirin di tumorên hişk de, di nav de glioma, 33 hate nas kirin û vegotina wê bi pola glioma re têkildar e.Delîlên berhevkirî destnîşan dikin ku miR-21 onkojenek nû ye ku di mezinbûna glioma de wekî faktorek antî-apoptotîk tevdigere û di tevnvîs û plazmaya nexweşiyên mêjiyê mirovan de pir zêde tê diyar kirin.Balkêş e, neçalakkirina miR-21 di hucre û tevnên glioma de ji ber apoptosis-girêdayî kaspase astengkirina belavbûna hucreyê vedigire.Analîza biyoinformatîk a armancên pêşbînîkirî yên miR-21 gelek genên tepisandina tumorê yên ku bi riyên apoptozê ve girêdayî ne, di nav de mirina hucreyê ya bernamekirî 4 (PDCD4), tropomyosin (TPM1), PTEN, û qutiya çeqê O1 (FoxO1), bi cîhê girêdana miR-2121 re eşkere kir..22.38.
FoxO1, wekî yek ji faktorên veguheztinê (FoxO), di pêşkeftina cûrbecûr kansera mirovî de beşdar e û dikare vegotina genên tepisandina tumorê yên wekî p21, p27, Bim, û FasL40 bi rê ve bibe.FoxO1 dikare astengkerên çerxa hucreyê yên wekî p27 girêde û çalak bike da ku mezinbûna hucreyê bitepisîne.Digel vê yekê, FoxO1 bandorkerek sereke ya nîşana PI3K / Akt e û gelek pêvajoyên biyolojîkî yên wekî pêşkeftina çerxa hucreyê û cûdabûna hucreyê bi aktîvkirina veguheztina p2742 ve rê dide.
Di encamnameyê de, em bawer dikin ku miR-21 exosomal ku ji mîkroglia vegirtî bi Toxoplasma ve hatî çêkirin, dibe ku wekî rêgezek mezinbûna hucreyên glioma rolek girîng bilîze (Wêne. 7).Lêbelê, lêkolînên din hewce ne ku têkiliyek rasterast di navbera exosomal miR-21, enfeksiyona Toxoplasma ya guheztin, û mezinbûna glioma de bibînin.Tê payîn ku ev encam ji bo lêkolîna têkiliya di navbera enfeksiyona Toxoplasma û bûyera glioma de xalek destpêkek peyda bikin.
Di vê lêkolînê de diyagramek şematîkî ya mekanîzmaya kanserojeneya glioma (mêjî) tê pêşniyar kirin.Nivîskar di PowerPoint 2019 (Microsoft, Redmond, WA) de xêz dike.
Hemî protokolên ceribandinê yên di vê lêkolînê de, tevî karanîna heywanan, li gorî Rêbernameyên Etîk Standard ên Lênihêrîna Heywanan û Komîteya Bikarhêner a Zanîngeha Neteweyî ya Seoul bûn û ji hêla Lijneya Vekolîna Saziyê ya Dibistana Derman a Zanîngeha Neteweyî ya Seoul (IRB-hejmara SNU- 150715).-2).Hemî prosedurên ceribandinê li gorî pêşniyarên ARRIVE hatine kirin.
Mîkroglia mişkê BV2 û hucreyên glioma mirovî U87 bi rêzê li Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM; Welgene, Seoul, Kore) û Roswell Park Memorial's Meddium (RPMI; Welgene), her yek ji %10 seruma fetal a fetusê, 4 mMl tê çandin. glutamine, 0,2 mM penîsîlîn û 0,05 mM streptomycin.Şane di înkubatoreke bi %5 CO2 de di 37°C de hatin çandin.Rêzeya hucreya glioma ya din, U118, ji bo berhevdana bi hucreyên U87 re hate bikar anîn.
Ji bo veqetandina exozomên ji T. gondii-vegirtî yên RH û ME49, T. gondii tachyzoites (strain RH) ji valahîya zikê mişkên BALB/c yên 6 hefteyî yên ku 3-4 roj berê derzî kirin, hatin berhev kirin.Tachyzoites sê caran bi PBS hatin şuştin û bi santrîfugasyonê li 40% Percoll (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)43 hatin paqij kirin.Ji bo bidestxistina takîzoîtên cureya ME49, mişkên BALB/c bi intraperitonely 20 kîstên tevnvîsê hatin derzîkirin û veguheztina takîzoît a di kîstan de bi şuştina valahîya zikê di roja 6-8-an de piştî enfeksiyonê (PI) hate berhev kirin.Mişk bi PBS vegirtî.Tachyzoites ME49 di hucreyên ku bi 100 μg/ml penîsîlîn hatine zêdekirin (Gibco/BRL, Grand Island, NY, USA), 100 μg/ml streptomycin (Gibco/BRL), û 5% seruma bezê fetal (Lonza, Walkersville, MD) hatin mezin kirin. .., USA) li 37 °C û 5% karbondîoksîtê.Piştî çandiniyê di hucreyên Vero de, tachyzoites ME49 du caran di derziyek 25 gauge re û dûv re jî di parzûnek 5 μm re derbas kirin da ku bermah û şaneyan ji holê rakin.Piştî şuştinê, tachyzoites di PBS44 de ji nû ve hatin sekinandin.Kîstên tevnî yên Toxoplasma gondii çenga ME49 bi derzîlêdana intraperitoneal a kîstên ku ji mêjiyê mişkên C57BL/6 vegirtî hatine veqetandin (Navenda Orient Bio Animal, Seongnam, Kore).Mêjiyê mişkên bi ME49 vegirtî piştî PI-ê 3 mehan hate berhev kirin û di bin mîkroskopê de ji bo veqetandina kîstê hate hûr kirin.Mişkên enfeksiyonê di bin şert û mercên taybetî yên bê pathogen (SPF) de li Dibistana Bijîjkî ya Zanîngeha Neteweyî ya Seulê hatin girtin.
Tevahiya RNA ji exozomên BV2-derketî, şaneyên BV2 û tevnvîsan bi karanîna miRNeasy Mini Kit (Qiagen, Hilden, Almanya) li gorî rêwerzên çêker, tevî dema înkubasyonê ya ji bo gavê avêtinê, hate derxistin.Giraniya RNA li ser spektrofotometerek NanoDrop 2000 hate destnîşankirin.Qalîteya mîkroareyên RNA bi karanîna biyoanalyzerek Agilent 2100 (Agilent Technologies, Amstelveen, Hollanda) hate nirxandin.
DMEM bi 10% FBS xizan-exosome bi ultracentrifugation li 100,000g ji bo 16 demjimêran li 4°C hate amadekirin û bi parzûnek 0,22 μm (Nalgene, Rochester, NY, USA) hate parzûn kirin.Hucreyên BV2, 5 × 105, di DMEM-ê de ku tê de 10% FBS-ê exozomê kêmbûyî û 1% antîbiyotîk li 37°C û 5% CO2 vedihewîne, hatin çandin.Piştî 24 saetan înkubasyonê, takîzoîtên çenga RH an jî ME49 (MOI = 10) li şaneyan hatin zêdekirin û parazîtên ne-dagirker di nav saetekê de hatin rakirin û ji nû ve bi DMEM hatin dagirtin.Exosomên ji şaneyên BV2 bi santrîfujasyona dîferansê ya guhertî, rêbaza herî berfireh tê bikar anîn, hatin veqetandin.Ji bo analîza RNA an proteîn pelleta exosome di 300 µl PBS de ji nû ve suspend bikin.Giraniya exozomên veqetandî bi karanîna kîtek testa proteîna BCA (Pierce, Rockford, IL, USA) û spektrofotometerek NanoDrop 2000 hate destnîşankirin.
Avêtinên ji hucreyên BV2 an exozomên ku ji BV2 têne derxistin di çareseriya derxistina proteîna PRO-PREP™ (iNtRon Biotechnology, Seongnam, Kore) de hatin lîzkirin û proteîn li ser Coomassie şînahiya şîn a 10% SDS gêlê polyacrylamide rengkirî hatin barkirin.Wekî din, proteîn ji bo 2 demjimêran veguheztin membranên PVDF.Blotên rojavayî bi karanîna antîpota Alix (Teknolojiya Signaling Cell, Beverly, MA, USA) wekî nîşanek exosomal hate pejirandin.IgG (H + L) dijî-mişkê bizinê ya bi HRP-ê (H + L) (Laboratorên Bethyl, Montgomery, TX, USA) û analîzkerek wêneya ronahiyê ya LAS-1000 plus (Fuji Photographic Film, Tokyo, Japonya) wekî antîbodyek duyemîn hate bikar anîn..Ji bo lêkolîna mezinahî û morfolojiya exozoman mîkroskopiya elektronê ya veguheztinê hate kirin.Exosomên ku ji şaneyên BV2 (6,40 µg/µl) hatine veqetandin li ser tevnikên bi karbon-pêçandî hatine amadekirin û 1 hûrdem bi 2% uranyl acetate bi neyînî hatine reng kirin.Nimûneyên amadekirî di voltaja bilez a 80 kV de bi karanîna JEOL 1200-EX II (Tokyo, Japonya) bi kameraya ES1000W Erlangshen CCD (Gatan, Pleasanton, CA, USA) ve hatî dîtin.
Exosomên ji BV2-ê derketine bi karanîna Kita Girêdana Fluorescent a Sor a PKH26 (Sigma-Aldrich, St.Hucreyên U87, 2 × 105, bi eksozomên bi PKH26 (sor) an jî bê egzozom wekî kontrolek neyînî, 24 demjimêran li 37 ° C di inkubatorek 5% CO2 de hatin inkubasyon kirin.Navokên hucreya U87 bi DAPI (şîn) hatin xemilandin, hucreyên U87 di 4% paraformaldehyde de 15 hûrdem li 4°C hatin sabît kirin û dûv re di pergala mîkroskopa konfokal a Leica TCS SP8 STED CW (Leica Microsystems, Mannheim, Almanya) de hate analîz kirin.çavdêrîkirin.
cDNA ji siRNAyê bi karanîna senteza rêza yekem a Mir-X siRNA û kîta SYBR qRT-PCR (Takara Bio Inc., Shiga, Japonya) hate sentez kirin.PCR-ya mîqdar a dema rast bi karanîna pergala tespîtkirina PCR-ya dema rast a iQ5 (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) bi karanîna primers û şablonên ku bi SYBR Premix re tevlihev bûne hate kirin.ADN ji bo 40 çerxên denaturasyonê di 95°C de ji bo 15 seqeyan û di 60°C de ji bo 60 seqeyan venekirin hate zêdekirin.Daneyên ji her reaksiyonên PCR-ê bi karanîna modula analîzkirina daneyê ya nermalava pergala optîkî ya iQ™5 (Bio-Rad) hate analîz kirin.Guhertinên têkildar ên di vegotina genê de di navbera genên mebestên bijartî û β-actin/siRNA (û U6) de bi karanîna rêbaza kemînê ya standard hatin hesibandin.Rêzên destpêkê yên ku têne bikar anîn di Tablo 1 de têne destnîşan kirin.
3 x 104 hucreyên glioma U87 di lewheyên 96-kaniyê de hatin çandin û bi exozomên bi Toxoplasma vegirtî yên ku ji BV2 (50 μg/mL) an exozomên nepulse yên ku ji BV2 (50 μg/mL) derketine re wekî kontrol di demjimêrên 12, 18 û 36 de hatin tevlihev kirin. .Rêjeya belavbûna hucreyê bi karanîna Kit-8-ê (Dojindo, Kumamoto, Japonya) (Hêjmarên Pêvek S1-S3) 46 bi kar anîn.
Mişkên tazî yên mê BALB/c yên 5 hefteyî ji Orient Bio (Seongnam-si, Koreya Başûr) hatin kirîn û bi ferdî di qefesên sterîl de li germahiya odeyê (22±2°C) û nemiyê (45±15°C) hatin hilanîn.%) li germahiya odeyê (22±2°C) û nemiyê (45±15%).Di bin SPF (Navenda Heywanan a Dibistana Derman a Zanîngeha Neteweyî ya Seoul) de çerxa ronahiyê ya 12 saetan û çerxa tarî ya 12 saetan hate kirin.Mişk bi korfelaqî li sê koman ji her yekê 5 mişk hatin dabeş kirin û hemî koman bi 400 ml PBS ku tê de 1 x 107 şaneyên glioma U87 hene û faktora mezinbûnê BD Matrigel™ kêm kir (BD Science, Miami, FL, USA) di bin çerm de hatin derzî kirin.Şeş roj piştî derzîlêdana tumorê, 200 mg exozomên ku ji şaneyên BV2 (bi/bê enfeksiyona Toxoplasma) derketine, li cîhê tumorê hatin derzî kirin.Bîst û du roj piştî enfeksiyona tumorê, mezinahiya mêşên di her komê de heftê sê caran bi pîvazê hate pîvandin, û qebareya tîmorê bi formulê hate hesibandin: 0,5×(firahî)×2×dirêjî.
Analîza vegotina mîkroRNAyê bi karanîna rêzika miRNA ya miRCURYTM LNA, nifşê 7-an, rêzikên mmu û rno (EXIQON, Vedbaek, Danîmarka) 1119 mişkên baş-taybetmendî di nav 3100 lêkolînên girtina miRNA yên mirov, mişk û mişkan de vedihewîne.Di vê prosedurê de, 250 heta 1000 ng ji ARN-a tevahî ji 5'-fosfatê bi dermankirina bi fosfataza alkalîn a rovî ya golikê ve hate rakirin û dûv re jî bi etîketa bi rengê floransê kesk Hy3.Dûv re nimûneyên binavkirî bi barkirina slaytên mîkroarray ve bi karanîna kîteyek odeya hîbrîdîzasyonê (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA) û kîtek slide ya hîbrîdîzasyonê (Teknolojiyên Agilent) ve hatin hîbrîdîze kirin.Hîbrîdîzasyon 16 demjimêran li 56 ° C hate kirin, dûv re mîkroarray li gorî pêşniyarên çêker hatin şûştin.Dûv re slaytên mîkroarrayê yên pêvajoyî bi karanîna pergala skankerek mîkroarray Agilent G2565CA (Teknolojiyên Agilent) hatin qefilandin.Wêneyên şelandî bi karanîna nermalava Agilent Feature Extraction guhertoya 10.7.3.1 (Teknolojiyên Agilent) hatin îtxalkirin û tundiya floransê ya her wêneyê bi karanîna pelê GAL-ê ya têkildar a protokola Exiqon-ê guhertî hate pîvandin.Daneyên mîkroarray ji bo lêkolîna heyî di databasa GEO de di bin jimara gihîştinê GPL32397 de têne razandin.
Profîlên derbirînê yên miRNAyên exosomal ên gihîştî yên di mîkroglia stûnên RH an ME49 ên ku bi Toxoplasma vegirtî ne bi karanîna amûrên torê yên cihêreng hatine analîz kirin.MiRNAyên ku bi pêşkeftina tumorê re têkildar in bi karanîna miRWalk2.0 (http://mirwalk.umm.uni-heidelberg.de) hatine nas kirin û bi tundiya sînyala normalîzekirî (log2) ji 8.0 mezintir hatine fîlter kirin.Di nav miRNA-yan de, miRNAyên ku bi rengek cûda têne diyar kirin hate dîtin ku ji hêla analîzkirina parzûnê ya miRNA-yên ku ji hêla RH an ME49 stêrên ku bi T. gondii vegirtî hatine guheztin ji 1,5 qat zêdetir hatine guheztin.
Hucre di lewheyên şeş-kalî de (3 x 105 hucre / baş) li opti-MEM (Gibco, Carlsbad, CA, USA) bi karanîna Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) hatin çandin.Hucreyên transfected ji bo 6 saetan hatin çandin û paşê navgîn ji bo navgînek tam a nû hate guhertin.Şaneyên 24 saetan piştî veguheztinê hatin berhevkirin.
Analîza statîstîkî bi piranî bi karanîna T-testa Xwendekarê bi nermalava Excel (Microsoft, Washington, DC, USA) hate kirin.Ji bo analîzkirina heywanên ceribandinê, ANOVA-ya du-alî bi karanîna nermalava Prism 3.0 (GraphPad Software, La Jolla, CA, USA) hate kirin. P-nirxên <0.05 wekî statîstîkî girîng têne hesibandin. P-nirxên <0,05 ji hêla statîstîkî ve girîng têne hesibandin. Znacheniya P <0,05 считались статистически значимыми. Nirxên P <0.05 ji hêla statîstîkî ve girîng têne hesibandin. P 值< 0.05 被认为具有统计学意义. P 值<0,05 Znacheniya P <0,05 считались статистически значимыми. Nirxên P <0.05 ji hêla statîstîkî ve girîng têne hesibandin.
Hemî protokolên ceribandinê yên ku di vê lêkolînê de hatine bikar anîn ji hêla Desteya Lêkolînê ya Saziyê ya Dibistana Dermanê ya Zanîngeha Neteweyî ya Seoul (hejmara IRB SNU-150715-2) ve hatine pejirandin.
The data used in this study are available upon reasonable request from the first author (BK Jung; mulddang@snu.ac.kr). And the microarray data for the current study is deposited in the GEO database under registration number GPL32397.
Furley, J. et al.Di sala 2018-an de bûyer û mirina penceşêrê ya gerdûnî ya texmînkirî: Çavkanî û rêbazên GLOBOCAN.Jêfêhmî.J. Ruck 144, 1941–1953 (2019).
Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS Nêrînek li ser faktorên xetereyê yên tumorên mêjî û destwerdanên wan ên dermankirinê. Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS Nêrînek li ser faktorên xetereyê yên tumorên mêjî û destwerdanên wan ên dermankirinê.Reşîd, S., Rehman, K. û Akash, MS Vekolînek li ser faktorên xetereyê ji bo tumorên mêjî û destwerdanên dermankirinê yên mezin. Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS 深入了解脑肿瘤的危险因素及其治疗干预措施。 Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS Têgihiştina kûr a faktorên xetereya tumora mêjî û destwerdanên dermankirinê.Reşîd, S., Rehman, K. û Akash, MS Vekolînek li ser faktorên xetereyê ji bo tumorên mêjî û destwerdanên dermankirinê yên mezin.Zanistiya Biyomedical.Dermanvan.143, 112119 (2021).
Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. Têkiliyên bakterî-vîrûs ên di penceşêrên rêça zayendî ya orodigestive û jinan de: Kurteyek ji delîlên epîdemîolojîk û laboratîf. Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. Têkiliyên bakterî-vîrûs ên di penceşêrên rêça zayendî ya orodigestive û jinan de: Kurteyek ji delîlên epîdemîolojîk û laboratîf.Kato I., Zhang J. û Sun J. Têkiliyên bakterî-vîrûs ên di kansera tîrêjê gastrointestinal a mirovî û rêça zayendî ya jinê de: kurteyek daneyên epîdemîolojîk û laboratîf. Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. J.据总结. Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. Têkiliya bakterî-vîrûs a di vejandina valahiya devkî ya mirovî û rêça hilberîna jinê de: kurteya zanistiya nexweşiya populer û delîlên laboratîf.Kato I., Zhang J. û Sun J. Têkiliyên bakterî-viral ên di penceşêra gastrointestinal a mirovan û kansera zayendî ya jinê de: kurteyek daneyên epîdemîolojîk û laboratîf.Kanser 14, 425 (2022).
Magon, KL & Parish, JL Ji enfeksiyonê heya penceşêrê: Vîrûsên tumora DNA çawa karbona navendî û metabolîzma lîpîdê ya hucreya mêvandar diguhezînin. Magon, KL & Parish, JL Ji enfeksiyonê heya penceşêrê: Vîrûsên tumora DNA çawa karbona navendî û metabolîzma lîpîdê ya hucreya mêvandar diguhezînin.Mahon, KL û Parish, JL Enfeksiyona agir ji penceşêrê re: vîrusên tumor-bingeha DNA çawa karbona navendî û metabolîzma lîpîdê ya hucreya mêvandar diguhezînin. Magon, KL & Parish, JL 从感染到癌症：DNA 肿瘤病毒如何改变宿主细胞的中心碳和脂质代谢 Magon, KL & Parish, JL Ji enfeksiyonê heya penceşêrê: Vîrûsên tumora DNA çawa karbona navendî û metabolîzma lîpîdê ya hucreya mêvandar diguhezînin.Mahon, KL û Parish, JL Enfeksiyona penceşêrê dişewitîne: Vîrûsên tumora DNA çawa karbona navendî û metabolîzma lîpîdê di hucreyên mêvandar de diguhezînin.Biyolojiya Vekirî.11, 210004 (2021).
Correia da Costa, JM et al.Estrojenên katekol ên schistosomes û kezebê û kansera bi helminth-ê ve girêdayî ye.pêşde.hundir germ.5, 444 (2014).