Spas ji bo serdana Nature.com.Guhertoya geroka ku hûn bikar tînin piştgirîya CSS-ê sînordar e.Ji bo ezmûna çêtirîn, em pêşniyar dikin ku hûn gerokek nûvekirî bikar bînin (an jî Moda Lihevhatinê ya di Internet Explorer de neçalak bikin).Di vê navberê de, ji bo misogerkirina piştgirîya domdar, em ê malperê bê şêwaz û JavaScript pêşkêş bikin.
Vektorên genê yên ji bo dermankirina fîbroza kîstîk a pişikê divê berbi rêyên hewayê veguhêz werin armanc kirin, ji ber ku veguheztina pişikê ya periferîkî bandorek dermankirinê nîne.Karbidestiya veguheztina vîrus rasterast bi dema rûniştina hilgirê ve girêdayî ye.Lêbelê, şilavên radestkirinê yên wekî hilgirên genê bi xwezayî di dema înhalasyonê de di nav alveolan de belav dibin, û perçeyên dermankirinê yên her şeklî bi veguhastina mucociliary zû têne rakirin.Dirêjkirina dema rûniştinê ya hilgirên genê di rêka nefesê de girîng e lê bi destxistina wê dijwar e.Parçeyên magnetîkî yên hilgirê-conjugated ên ku dikarin berbi rûyê rêça nefesê ve werin rêve kirin, dikarin hedefgirtina herêmî baştir bikin.Ji ber pirsgirêkên bi wênekêşiya in vivo re, reftarên pirçikên magnetîkî yên wusa piçûk ên li ser rûyê hewayê di hebûna zeviyek magnetîkî ya sepandî de kêm tê fêm kirin.Armanca vê lêkolînê ew bû ku meriv wênekêşiya synchrotron bikar bîne da ku di vivo de tevgera rêzek perçeyên magnetîkî yên di trachea mişkên anestezkirî de xuya bike da ku dînamîk û şêwazên tevgerê yên perçeyên yekane û mezin di vivo de lêkolîn bike.Dûv re me di heman demê de nirxand ka gelo radestkirina pariyên magnetîkî yên lentîviral di hebûna zeviyek magnetîkî de dê karîgeriya veguheztinê di trakeya mişkê de zêde bike.Wêneya tîrêjê ya synchrotron tevgera keriyên magnetîkî yên di qadên magnetîkî yên rawestayî û tevgerîn de li vitro û in vivo nîşan dide.Parçeyên bi karanîna magnetan bi hêsanî li ser rûyê riyên hewayê yên zindî nayên kaş kirin, lê di dema veguheztinê de, depo li qada dîtinê, ku qada magnetîkî ya herî bihêz e, kom dibin.Di heman demê de dema ku perçeyên magnetîkî yên lentiviral di hebûna zeviyek magnetîkî de hatin radest kirin, karîgeriya veguheztinê jî şeş qat zêde bû.Bi hev re, van encaman destnîşan dikin ku perçeyên magnetîkî yên lentiviral û qadên magnetîkî dibe ku nêzîkatiyên hêja bin ji bo baştirkirina armanckirina vektora genê û astên veguheztinê yên di rêyên hewayê yên guhêrbar de di vivo de.
Fîbroza kîstîk (CF) ji ber guheztinên genek yekane ku jê re regulatorê veguheztina transmembranê ya CF (CFTR) tê gotin.Proteîna CFTR kanalek îyonek e ku di gelek hucreyên epîtelyal de li seranserê laş, tevî rêyên hewayê, cîhek sereke di pathogenesis fibroza kîstîk de heye.Kêmasiyên di CFTR de rê li ber veguheztina avê ya ne normal, dehîdrata rûbera hewayê, û kêmbûna kûrahiya şilava rûkala hewayê (ASL) vedike.Di heman demê de ew şiyana pergala veguheztina mucociliary (MCT) ya paqijkirina rêyên hewayê ji perçeyên nehskirî û pathogenan jî xera dike.Armanca me ew e ku em tedawiyek genê lentiviral (LV) pêşve bibin da ku kopiyek rast a gena CFTR radest bike û tenduristiya ASL, MCT, û pişikê baştir bike, û berdewamkirina pêşkeftina teknolojiyên nû yên ku dikarin van parameteran di vivo1 de bipîvin.
Vektorên LV yek ji wan berendamên pêşeng in ji bo tedawiya genê ya fîbroza kîstîk, nemaze ji ber ku ew dikarin bi domdarî genê dermankirinê di nav hucreyên bingehîn ên hewayê (hucreyên stem ên riya hewayê) de yek bikin.Ev girîng e ji ber ku ew dikarin hîdratasyon û paqijiya mukusê ya normal vegerînin bi veqetandina nav hucreyên rûbera hewayê yên bi gen-serrastkirî yên fonksiyonel ên ku bi fibroza kîstîk ve girêdayî ne, û di encamê de feydeyên jiyanî werdigirin.Pêdivî ye ku vektorên LV li dijî rêyên hewayê yên birêkûpêk werin rêve kirin, ji ber ku li vir tevlêbûna pişikê di CF de dest pê dike.Radestkirina vektorê kûrtir di pişikê de dibe ku bibe sedema veguheztina alveolar, lê ev yek di fibroza kîstîk de bandorek dermankirinê nîne.Lêbelê, şilavên wekî hilgirên genê bi xwezayî dema ku piştî zayînê têne hilmijandin derbasî alveolan dibin3,4 û perçeyên dermankirinê bi lez û bez ji hêla MCT ve di nav valahiya dev de têne derxistin.Karbidestiya veguheztina LV rasterast bi dirêjahiya dema ku vektor nêzî şaneyên armanc dimîne ve girêdayî ye da ku destûr bide girtina hucreyê - "dema rûniştinê" 5 ku bi herikîna hewaya herêmî ya tîpîk û her weha girtina hevrêz a mûk û pariyên MCT bi hêsanî tê kurt kirin.Ji bo fibroza kîstîk, şiyana dirêjkirina dema rûniştinê ya LV di rêyên hewayê de girîng e ji bo bidestxistina astên bilind ên veguheztinê di vê deverê de, lê heya nuha dijwar bûye.
Ji bo derbaskirina vê astengiyê, em pêşniyar dikin ku pirçikên magnetîkî yên LV (MP) dikarin bi du awayên temamker bibin alîkar.Pêşîn, ew dikarin bi magnetek berbi rûyê hewayê ve werin rêve kirin da ku armancgirtinê baştir bikin û bibin alîkar ku perçeyên hilgirê genê li devera rast a rêça hewayê bin;û ASL) diçin nav qata şaneyê 6. Parlamenter bi berfirehî wekî wesayîtên gihandina dermanên armanckirî têne bikar anîn dema ku ew bi antîpêdan, dermanên kemoterapî, an molekulên din ên piçûk ên ku bi parzûnên hucreyê ve girêdidin an jî bi receptorên rûyê hucreyê yên têkildar ve girêdidin û li cîhên tumorê dicivin, têne bikar anîn. hebûna elektrîkê statîk.Zeviyên magnetîkî yên ji bo dermankirina penceşêrê 7. Rêbazên din ên "hîpertermîk" ji bo kuştina şaneyên tumor bi germkirina parlamenteran têne armanc kirin dema ku dikevin ber zeviyên magnetîkî yên lerzbar.Prensîba veguheztina magnetîkî, ku tê de zevîyek magnetîkî wekî kargêrek veguheztinê tê bikar anîn da ku veguheztina DNA di nav hucreyan de zêde bike, bi gelemperî di vitro de bi karanîna rêzek vektorên genê yên ne-vîrûs û viral ji bo xetên şaneyê yên ku veguheztin dijwar têne bikar anîn. ..Karbidestiya magnetotransfection LV bi radestkirina LV MP in vitro di nav rêzek hucreya epîteliya bronşiya mirovî de di hebûna zeviyek magnetîkî ya statîk de hate saz kirin, ku li gorî vektora LV tenê 186 qatan karbidestiya veguheztinê zêde dike.LV MT di heman demê de li modelek in vitro ya fîbroza kîstîk jî hate sepandin, ku veguheztina magnetîkî veguheztina LV-ê di çandên navbeynkariya hewa-avî de bi faktorek 20-ê di hebûna fîbroza kîstîk de sputum10 zêde kir.Lêbelê, magnetotransfeksyona organên in vivo bala kêm kêm kişandiye û tenê di çend lêkolînên heywanan de11,12,13,14,15, nemaze di pişikan de16,17, hatiye nirxandin.Lêbelê, îmkanên veguheztina magnetîkî di terapiya pişikê de di fibroza kîstîk de zelal in.Tan et al.(2020) got ku "lêkolînek pejirandî ya li ser radestkirina pişikê ya bi bandor a nanoparçeyên magnetîkî dê rê li ber stratejiyên paşerojê yên înhalasyona CFTR veke da ku encamên klînîkî li nexweşên bi fibroza kîstîk baştir bike"6.
Tevgera pariyên magnetîkî yên piçûk ên li ser rûyê rîya respirasyonê di hebûna zeviyek magnetîkî ya sepandî de dijwar e ku were dîtin û lêkolîn kirin, û ji ber vê yekê ew kêm têne fam kirin.Di lêkolînên din de, me ji bo nîgarkirina ne-dagirker û pîvandina hûrgelên di vivo de di kûrahîya ASL18 û tevgera MCT19 de, 20 ji bo pîvandina rasterast hîdratasyona rûyê kanala gazê, rêbazek Pergala Berevajîkirina X-Tiraja Xê ya Bingeha Propagasyona Synchrotron (PB-PCXI) pêş xist. û wekî bandoriya dermankirina nîşana destpêkê tê bikar anîn.Wekî din, rêbaza meya pîvandinê ya MCT-ê perçeyên bi pîvana 10-35 μm bikar tîne ku ji alumina an cama bi nîşaneya refraksiyonê ya bilind pêk tê wekî nîşankerên MCT-ê yên ku bi PB-PCXI21 têne xuyang kirin bikar tîne.Her du rêbaz ji bo wênekirina cûrbecûr celebên perçeyan, tevî parlamenteran, minasib in.
Ji ber çareseriya mekan û demkî ya bilind, vekolînên me yên ASL û MCT-ya PB-PCXI baş in ku ji bo lêkolîna dînamîk û şêwazên behrê yên perçeyên yekane û mezin in vivo ji me re bibin alîkar ku em rêbazên radestkirina genê MP fam bikin û xweşbîn bikin.Nêzîkatiya ku em li vir bikar tînin li ser bingeha lêkolînên me bi karanîna tîrêjê SPring-8 BL20B2 ve girêdayî ye, ku tê de me tevgera şilavê li dû radestkirina dozek vektorek dumî di nav rêyên hewayê yên pozê û pişikê yên mişkan de dît ku ji bo ravekirina şêwazên vegotina genê heterojen ên ku hatine dîtin alîkariyê bikin. di gena me de.lêkolînên heywanan bi dozek hilgirê 3.4.
Armanca vê lêkolînê ev bû ku meriv synchrotrona PB-PCXI bikar bîne da ku tevgerên in vivo yên rêzek parlamenteran di trachea mişkên zindî de xuya bike.Van lêkolînên wênekêşiya PB-PCXI ji bo ceribandina rêza MP, hêza zeviya magnetîkî, û cîh hatine çêkirin da ku bandora wan li ser tevgera MP were destnîşankirin.Me texmîn kir ku zeviyek magnetîkî ya derveyî dê alîkariya MF-ya radestkirî bimîne an biçe qada armancê.Van lêkolînan di heman demê de rê da me ku em konfigurasyonên magnetîkî yên ku mîqdara pariyên ku di trakeyê de mayî piştî hilweşandinê herî zêde destnîşan bikin.Di rêza duyemîn a lêkolînan de, me armanc kir ku em vê veavakirina çêtirîn bikar bînin da ku şêwaza veguheztinê ya ku ji gihandina in vivo ya LV-MPs ji rêyên hewayê yên mişkî re tê destnîşan kirin, li ser texmîna ku radestkirina LV-MP di çarçoweya armanckirina rêyên hewayê de dê encam bide. di zêdekirina kargêriya veguheztina LV de..
Hemî lêkolînên heywanan li gorî protokolên ku ji hêla Zanîngeha Adelaide (M-2019-060 û M-2020-022) û Komîteya Exlaqê ya Heywanan a Synchrotron SPring-8 ve hatine pejirandin hatine kirin.Ceribandin li gorî pêşniyarên ARRIVE hatin kirin.
Hemî wêneyên tîrêjê yên x-ray li tîrêjê BL20XU li synchrotrona SPring-8 li Japonya bi karanîna sazûmanek mîna ya ku berê hatî destnîşan kirin hatine kişandin21,22.Bi kurtasî, qutiya ceribandinê 245 m dûrî zengila hilanîna synchrotronê bû.Dûrahiya nimûne-to-detektorê 0,6 m ji bo lêkolînên wênekêşiya perçeyê û 0,3 m ji bo lêkolînên wênekêşiya in vivo tê bikar anîn da ku bandorên berevajî qonaxê biafirîne.Tîrêjek monokromatîkî ya bi enerjiya 25 keV hate bikar anîn.Wêneyên bi karanîna veguherînerek tîrêjê ya X-ê ya bi rezîliya bilind (SPring-8 BM3) bi detektorek sCMOS-ê ve hatî girtin.Veguhaster tîrêjên X-ê vediguherîne ronahiya xuyayî bi karanîna sîntilatorek stûr a 10 μm (Gd3Al2Ga3O12), ku dûv re bi karanîna armancek mîkroskopê ×10 (NA 0.3) ber bi sensora sCMOS ve tê rêve kirin.Detektora sCMOS Orca-Flash4.0 (Hamamatsu Photonics, Japonya) bû ku bi mezinahiya rêzê 2048 × 2048 pixel û mezinahiya pixelek xav 6,5 × 6,5 μm.Ev mîheng mezinahiyek pixelek isotropîk a bi bandor 0,51 μm û qada dîtinê ya bi qasî 1,1 mm × 1,1 mm dide.Demjimêra pêşandanê ya 100 ms hate hilbijartin da ku rêjeya sînyala-bo-dengê ya pariyên magnetîkî yên li hundur û derveyî rêyên hewayê zêde bike dema ku hunerên tevgerê yên ku ji ber nefesê têne kêm kirin.Ji bo lêkolînên di vivo de, şûşeyek tîrêjê ya bilez di rêça tîrêjê de hate danîn da ku dozaja tîrêjê bi bloka tîrêjê tîrêjê ya di navbera rûberan de bisînor bike.
Medya LV di tu lêkolînên wênekêşana SPring-8 PB-PCXI de nehat bikar anîn ji ber ku jûreya wênekêşana BL20XU ne pejirandî ya Biosewlehiya Asta 2 ye.Di şûna wê de, me ji du firoşkarên bazirganî rêzek parlementerên binavûdeng hilbijart ku cûrbecûr mezinahî, materyal, giraniya hesin, û sepanan vedihewîne - pêşî ji bo ku em fam bikin ka zeviyên magnetîkî çawa bandorê li tevgera parlamenteran di kapîlarên camê de dikin, û dûv re jî rêyên hewayê yên zindî.rû.Mezinahiya MP-ê ji 0,25 heta 18 μm diguhere û ji materyalên cûrbecûr hatî çêkirin (li Tablo 1 binêre), lê pêkhateya her nimûneyê, tevî mezinahiya pariyên magnetîkî yên di MP-yê de, nenas e.Li ser bingeha lêkolînên me yên MCT-ê yên berfireh 19, 20, 21, 23, 24, em hêvî dikin ku parlamenterên bi dirêjahiya 5 μm dikarin li ser rûyê hewaya trakeal werin dîtin, mînakî, bi kêmkirina çarçoveyên li pey hev da ku dîtina çêtir a tevgera MP were dîtin.Parlamenterek yekane ya 0,25 μm ji çareseriya cîhaza wênekêşiyê piçûktir e, lê tê pêşbînîkirin ku PB-PCXI berevajiya wan a volumetrî û tevgera şilava rûxê ya ku ew li ser têne razandin piştî ku têne razandin destnîşan bike.
Di tabloyê de ji bo her parlamenterek nimûne.1 di 20 μl kapîlarên camê de (Drummond Microcaps, PA, USA) bi pîvana hundurîn 0,63 mm hate amadekirin.Parçeyên korpuskuler di avê de peyda dibin, dema ku pariyên CombiMag di şilava xwedaniyê ya çêker de peyda dibin.Her lûle nîvî bi şilekê (nêzîkî 11 µl) tê dagirtin û li ser hêlîna nimûneyê tê danîn (li Figure 1 binêre).Kapîlarên camê bi rêzê ve li ser qonaxê di jûreya wênegiriyê de bi rengek horizontî hatine danîn û li kêlekên şilê hatine danîn.Magnetica 19 mm (bi dirêjahiya 28 mm) ji erda nadir, neodymium, hesin û boron (NdFeB) (N35, jimar. cat. LM1652, Jaycar Electronics, Awistralya) bi remanence 1,17 T hatî çêkirin, bi tabloya veguheztinê ya veqetandî ji bo bidestxistina Di dema renderkirinê de pozîsyona xwe ji dûr ve biguhezînin.Wêneya rontgenê dema ku magnet bi qasî 30 mm li jorê nimûneyê were danîn dest pê dike û wêne di 4 çarçove di çirkeyê de têne wergirtin.Di dema wênegirtinê de, magnet nêzîkê lûleya kapîlar a camê bû (bi dûrahiya 1 mm) û dûv re li ser boriyê gerand da ku bandora hêza zeviyê û pozîsyonê binirxîne.
Sazkirinek wênekêşiya in vitro ya ku di qonaxa wergerandina nimûneya xy de nimûneyên MP-ê di kapîlarên camê de vedihewîne.Rêya tîrêjê rontgenê bi xêzeke sor a xalî tê nîşankirin.
Piştî ku dîtina in vitro ya parlementeran hate damezrandin, binkeyek ji wan di vivo de li ser mêşên mê yên Wistar albino (~ 12 hefte, ~ 200 g) hate ceribandin.Medetomidine 0,24 mg/kg (Domitor®, Zenoaq, Japonya), midazolam 3,2 mg/kg (Dormicum®, Astellas Pharma, Japonya) û butorphanol 4 mg/kg (Vetorphale®, Meiji Seika).Mişk bi têkelê Pharma (Japonya) bi derzîlêdana intraperitoneal anestez kirin.Piştî anesthesiyê, ew ji bo wênegirtinê hatin amadekirin bi rakirina porê li dora trakeyê, têxistina boriyek endotracheal (ET; 16 Ga kannula intravenous, Terumo BCT), û wan di pozîsyona supine de li ser plakaya wênekêşiya xwerû ya ku tê de kîsikek germî tê de heye bêbandor kirin. ji bo parastina germahiya laş.22. Dûv re plakaya nîgarkirinê bi qonaxek nimûneyê ya di qutiya wênegiriyê de bi goşeyek sivik ve hate girêdan da ku trachea bi rengek horizontî li ser wêneya tîrêjê ya x-ray wekî ku di Figure 2a de tê xuyang kirin were rêz kirin.
(a) Sazkirina wênekêşana in vivo di yekîneya wênekêşana SPring-8 de, rêça tîrêjê ya X-ê bi xeta xalîçeya sor hatî nîşankirin.(b,c) Herêmîkirina magneta tracheal ji dûr ve bi karanîna du kamerayên IP-ê yên ortogonîkî ve hatî çêkirin.Li milê çepê yê wêneyê li ser ekranê, hûn dikarin pêla têlê ya ku serê xwe digire û kanûla radestkirinê ya ku di hundurê lûleya ET-ê de hatî saz kirin bibînin.
Pergalek pompeya sirincê ya ji dûr ve kontrolkirî (UMP2, World Precision Instruments, Sarasota, FL) ku 100 µl sirincek camê bikar tîne bi boriyek PE10 (0.61 mm OD, 0.28 mm ID) ve bi derziyek 30 Ga ve hate girêdan.Dema ku lûleya endotracheal têxin lûlê, pê ewle bin ku lûle di trakeyê de di cîhê rast de ye.Bi karanîna mîkropompek, pişka sirincê hate rakirin û serê boriyê di nimûneya MP ya ku were radest kirin de hate avêtin.Dûv re lûleya radestkirinê ya barkirî hate xistin nav lûleya endotracheal, û tîrê li beşa herî bihêz a qada magnetîkî ya ku me ya bendewarî lê tê xwestin hate danîn.Bidestxistina wêneyê bi karanîna detektorek bêhnê ya ku bi qutiya demjimêra me ya Arduino-yê ve girêdayî ye hate kontrol kirin, û hemî nîşan (mînak, germahî, nefes, vebûn/girtin û wergirtina wêneyê) bi karanîna Powerlab û LabChart (AD Instruments, Sydney, Avusturalya) hatin tomar kirin. 22 Dema Wêneyê Dema ku xanî tune bû, du kamerayên IP-yê (Panasonic BB-SC382) bi qasî 90° li hember hev hatin danîn û ji bo kontrolkirina pozîsyona magnetê ya li gorî trachea di dema wênegirtinê de têne bikar anîn (Wêne 2b, c).Ji bo kêmkirina hunerên tevgerê, ji her hilmekê wêneyek di dema deşta herikîna nefesê ya termînalê de hate bidestxistin.
Magnetî bi qonaxa duyemîn ve girêdayî ye, ku dibe ku ji dûr ve li derveyî laşê wênekêşiyê were danîn.Cihên cihêreng û veavakirina magnetê hatin ceribandin, di nav de: li goşeyek bi qasî 30° li jora trakeyê hatî danîn (avakirin di jimarên 2a û 3a de têne xuyang kirin);magnetek li jorê heywanê û ya din li jêr, bi stûnên ku ji bo kişandinê hatine danîn (Wêne 3b)., magnetek li jorê heywanê û yek jî li jêr, bi stûnên ku ji bo vegerandinê hatine danîn (Wêne 3c), û magnetek li jor û perpendîkular bi trakeyê re (Wêne 3d).Piştî sazkirina heywan û magnetê û barkirina MP ya di bin ceribandinê de di pompeya sirincê de, dozek 50 µl bi rêjeya 4 µl/sek li ser wergirtina wêneyan radest bikin.Dûv re magnet bi paş û paş ve li ser trachea an jî li seranserê trachea tête gerandin dema ku berdewamkirina wêneyan digire.
Veavakirina Magnetê ji bo wênekirina in vivo (a) magnetek li jorê trakeyê bi goşeyek bi qasî 30°, (b) du magnetên ku ji bo kişandinê hatine mîheng kirin, (c) du magnetên ku ji bo vekişînê hatine mîheng kirin, (d) magnetek li jor û perpendîkular trachea.Çavdêr bi rêya trakeyê ji dev heta pişikê nihêrî û tîrêjê tîrêjê ji milê çepê yê mişkê derbas bû û ji aliyê rastê derket.Magnetî yan bi dirêjahiya rêya hewayê yan jî çep û rast li ser trakeyê ber bi tîrêjê rontgenê ve tê gerandin.
Di heman demê de me hewil da ku di nebûna tevlihevbûna nefesê û rêjeya dil de dîtinî û tevgera perçeyên di rêyên hewayê de diyar bikin.Ji ber vê yekê, di dawiya heyama wênegirtinê de, heywan ji ber zêdedoza pentobarbital (Somnopentyl, Pitman-Moore, Washington Crossing, USA; ~ 65 mg/kg ip) bi awayekî mirovî hatin kuştin.Hin ajal li ser platforma wênekêşandinê hatin hiştin, û piştî sekinandina nefesê û lêdana dil, pêvajoya wênekêşandinê hate dubare kirin, ger ku MP li ser rûyê hewayê xuya nebe dozek MP lê zêde kirin.
Wêneyên ku derketin ji bo zeviya darûz û tarî hatin rast kirin û dûv re di fîlimek de hatin berhev kirin (20 çarçowe di çirkeyê de; 15-25 × leza normal li gorî rêjeya nefesê ve girêdayî ye) bi karanîna skrîptek xwerû ya ku di MATLAB-ê de hatî nivîsandin (R2020a, The Mathworks).
Hemî lêkolînên li ser radestkirina vektorê genê LV li Navenda Lêkolînê ya Heywanan a Laboratoriya Zanîngeha Adelaide hatin kirin û armanc ew e ku encamên ceribandina SPring-8 bikar bînin da ku binirxînin ka radestkirina LV-MP di hebûna zeviyek magnetîkî de dikare veguheztina genê di vivo de zêde bike. .Ji bo nirxandina bandorên MF û zeviya magnetîkî, du komên heywanan hatin derman kirin: komekek bi LV MF bi cîhkirina magnetê ve hate derzî kirin, û koma din bi komek kontrolê re bi LV MF bêyî magnet hate derzî kirin.
Vektorên genê LV bi karanîna rêbazên berê yên 25, 26 ve hatine çêkirin.Vektora LacZ genek beta-galaktosîdase ya herêmî ya nukleerî ya ku ji hêla promotorê pêkhatî ya MPSV (LV-LacZ) ve tê rêve kirin, vedibêje, ku di hucreyên veguhezbar de hilberek reaksiyonê ya şîn çêdike, li pêş û beşên tevna pişikê xuya dike.Tîterasyon di çandên hucreyê de bi jimartina desta hejmara şaneyên LacZ-erênî bi karanîna hemocytometer ve hate kirin da ku titrê li TU / ml were hesibandin.Hilgir di -80°C de têne cryopreservekirin, berî bikar anînê têne hilanîn, û bi CombiMag ve bi tevlihevkirina 1:1 ve têne girêdan û bi kêmî ve 30 hûrdem berî radestkirinê li ser qeşayê têne înkubakirin.
Mişkên Sprague Dawley yên normal (n = 3/kom, ~2-3 ip anestezkirî bi tevliheviya 0,4 mg/kg medetomidine (Domitor, Ilium, Awistralya) û 60 mg/kg ketamine (Ilium, Awistralya) di 1 mehê de) ip ) derzî û kannûlasyona devkî ya ne-cerrahî bi 16 Ga kanûla hundurîn ve.Ji bo ku pê ewle bibe ku tevna rêça hewaya tracheal veguheztina LV-ê werdigire, ew bi karanîna protokola meya tevliheviya mekanîkî ya ku berê hatî destnîşan kirin hate şert kirin ku tê de rûbera hewaya trakeyê bi selikek têl ve bi eksê ve hate rijandin (N-Circle, derhênerê kevirê nitinol bêyî tîp NTSE-022115) -UDH, Cook Medical, USA) 30 p28.Dûv re, bi qasî 10 hûrdem piştî têkçûna di kabîneya biyoewlehiyê de, rêveberiya tracheal ya LV-MP hate kirin.
Qada magnetîkî ya ku di vê ceribandinê de hatî bikar anîn bi heman rengî wekî lêkolînek tîrêjê x-ê ya in vivo hate mîheng kirin, digel heman magnetîsên ku li ser trachea bi kelepên stentên distilasyonê ve têne girtin (Wêne 4).Hêjmarek 50 µl (2 x 25 µl aliquot) LV-MP bi karanîna pîpetek bi gêlê ya ku berê hatî destnîşan kirin bi trachea (n = 3 heywan) hate şandin.Koma kontrolê (n = 3 heywan) bêyî karanîna magnetek heman LV-MP wergirt.Piştî qedandina înfuzyonê, kanûla ji lûleya endotracheal tê derxistin û heywan tê derxistin.Berî ku were rakirin, magnet 10 hûrdeman li cihê xwe dimîne.Mişk bi meloxicam (1 ml/kg) (Ilium, Awistralya) ji binê çermê hatin derman kirin û dûv re vekişîna anesthesiyê bi derzîlêdana hundurîn a 1 mg/kg atipamazole hîdrochloride (Antisedan, Zoetis, Avusturalya).Mişk germ hatin girtin û heya ku bi tevahî ji anesthesiyê xelas bibin hatin çavdêrî kirin.
Amûra radestkirina LV-MP di kabîneyek ewlehiya biyolojîkî de.Hûn dikarin bibînin ku qaça gewr a Luer-lock ya lûleya ET ji dev derdikeve, û tîpa pileya gel a ku di jimarê de tê xuyang kirin di nav lûleya ET-ê de heya kûrahiya xwestî dikeve nav trachea.
Hefteyek piştî prosedûra rêveberiya LV-MP, heywan bi înhalasyona 100% CO2 bi mirovane hatin qurban kirin û îfadeya LacZ bi karanîna tedawiya meya X-gal standard hate nirxandin.Sê zengilên kartilajê yên herî caudal hatin rakirin da ku pê ewle bibin ku zirara mekanîkî an girtina şilavê ya ji ber danîna lûleya endotracheal dê di analîzê de nebe.Her trakeyek bi dirêjahî hate qut kirin da ku ji bo analîzê du nîvan bi dest bixe û di qedehek ku tê de lastika silîkon heye (Sylgard, Dow Inc) bi karanîna derziyek Minutien (Fine Science Tools) hate danîn da ku rûyê ronahiyê xuyang bike.Belavbûn û karektera şaneyên veguhastî bi wênekêşiya pêşiyê bi karanîna mîkroskopa Nikon (SMZ1500) bi kamerayek DigiLite û nermalava TCapture (Tucsen Photonics, Chinaîn) ve hate pejirandin.Wêneyên bi mezinbûna 20x (di nav de mîhenga herî zêde ya ji bo firehiya tevahî ya trakeyê jî tê de) hatin wergirtin, digel ku tevahiya dirêjahiya trakeyê gav bi gav tê xuyang kirin, di navbera her wêneyê de têra xwe lihevnekirinek peyda dike da ku rê bide wêneyan ku "dirûtin".Dûv re wêneyên ji her tracheyê bi karanîna algorîtmaya tevgera plankirî bi karanîna Edîtorê Wêne ya Hevbeş guhertoya 2.0.3 (Lêkolîna Microsoft) di yek wêneyek pêkhatî de hatin berhev kirin. Qada vegotina LacZ di hundurê wêneyên pêkhatî yên tracheal de ji her heywanek bi karanîna tîpek MATLAB-a otomatîk (R2020a, MathWorks) wekî ku berê hatî destnîşan kirin28, bi karanîna mîhengên 0.35 <Hue <0.58, Têrbûn> 0.15, û Nirx <0.7 hate hejmartin. Qada vegotina LacZ di hundurê wêneyên pêkhatî yên tracheal de ji her heywanek bi karanîna tîpek MATLAB-a otomatîk (R2020a, MathWorks) wekî ku berê hatî destnîşan kirin28, bi karanîna mîhengên 0.35 <Hue <0.58, Têrbûn> 0.15, û Nirx <0.7 hate pîvandin. Ploщадь экспрессии LacZ в составных изображениях трахеи от каждого животно была количествено diyarkirî bi bikaranîna otomatizirovannogo senaryoya MATLAB (R2020a, MathWorks), какo описано на 3,0,5,28, Nasыщенность> 0,15 и значение <0 ,7. Qada vegotina LacZ di wêneyên trakeal ên pêkhatî yên ji her heywanek de bi karanîna tîpek MATLAB-ê ya otomatîkî (R2020a, MathWorks) wekî ku berê hatî destnîşan kirin28 bi karanîna mîhengên 0.35 ve hate hejmartin.0,15 û nirx<0 ,7.如前所述，使用自动MATLAB 脚本（R2020a，MathWorks）对来自每只动物的气管复本（R2020a，MathWorks）对来自每只动物的气管复合可进行量化，使用0.35 < 色调< 0.58、饱和度> 0.15 和值< 0.7 的设置。如 前所 述 ， 自动 自动 Matlab 脚本 （（r2020a ， Mathworks） 来自 每 只 的 气管 复表达 量化 ， 使用 使用 使用 0,35 <色调 <0,58 、> 0,15 和值 <0,7 的。。。。。 HIP ........ Области экспрессии LacZ ji bo pêkhatinên isobrazheniyh trahei kajdogo colichestvenno opredelyali bi bikaranîna otomatizirovannogo senaryoya MATLAB (R2020a, MathWorks), kak opisano raneе, сè уште 5 0,15 û girîngî <0,7 . Qadên vegotina LacZ li ser wêneyên pêkhatî yên trakeya her heywanek bi karanîna skrîptek MATLAB-ya otomatîk (R2020a, MathWorks) wekî ku berê hatî destnîşan kirin bi karanîna mîhengên 0.35 < reng < 0.58, têrbûn > 0.15 û nirx <0.7 hate hejmartin.Bi şopandina rêgezên tevnvîsê di GIMP v2.10.24 de, ji bo her wêneyek pêkhatî maskek bi destan hate afirandin da ku qada tevnê nas bike û pêşî li her tespîtên derewîn ên li derveyî tevna tracheal bigire.Deverên rengkirî yên ji hemî wêneyên pêkhatî yên ji her heywanek hatine berhev kirin da ku tevahiya qada rengkirî ya wê heywanê bide.Dûv re qada boyaxkirî ji hêla tevahiya qada maskê ve hate dabeş kirin da ku herêmek normalîzekirî bistînin.
Her trakeyek di parafînê de hate bicihkirin û bi qalindahiya 5 mîkm hate perçe kirin.Beşan 5 hûrdeman bi sorê leza bêalî ya bêalî hatin xemilandin û wêne bi karanîna mîkroskopa Nikon Eclipse E400, kamera DS-Fi3 û nermalava girtina hêmanên NIS (guhertoya 5.20.00) hatin bidestxistin.
Hemî analîzên statîstîkî li GraphPad Prism v9 (GraphPad Software, Inc.) hatin kirin.Girîngiya statîstîkî li p ≤ 0.05 hate danîn.Normalî bi karanîna testa Shapiro-Wilk hate ceribandin û cûdahiyên di rengkirina LacZ de bi karanîna t-testek nehevkirî hate nirxandin.
Şeş parlementerên ku di Tablo 1 de hatine diyarkirin ji hêla PCXI ve hatine vekolîn, û xuyangî di Tablo 2 de tê vegotin. (nimûneyên di jimar 5 de têne nîşandan).MP3 û MP4 qels têne xuyang kirin (10-15% Fe3O4; 0,25 μm û 0,9 μm, bi rêzê).Her çend MP5 (98% Fe3O4; 0.25 μm) hin perçeyên herî piçûk ên hatine ceribandin jî dihewîne jî, ew ya herî diyar bû.Veqetandina hilberê CombiMag MP6 dijwar e.Di hemî rewşan de, şiyana me ya tesbîtkirina MF-an bi veguheztina magnetîsê ber bi kapilarê ve û paş ve pir çêtir bû.Gava ku magnet ji kapilarê dûr dikevin, pirtik bi zincîreyên dirêj ve hatine kişandin, lê her ku magnet nêzik bûne û hêza qada magnetîkî zêde dibe, zincîreyên pirtik kurtir dibin her ku pirtik ber bi rûxara jorîn a kapîlar ve diçin (binêre Vîdyoya Pêvek S1 : MP4), li rûerdê tîrêjiya parçikan zêde dike.Berevajî vê, dema ku magnet ji kapilarê tê derxistin, hêza zeviyê kêm dibe û parlamenter ji nû ve li zincîrên dirêj ên ku ji rûyê jorîn a kapilarê dirêj dibin, vediguhezin (binihêrin Vîdyoya Pêvek S2: MP4).Piştî ku magnet ji tevgerê raweste, pirtik piştî ku digihîjin rewşa hevsengiyê heya demekê livîna xwe didomînin.Gava ku MP ber bi rûxara jorîn a kapîlariyê ve diçe û dûr dikeve, pirçikên magnetîkî mêl dikin ku bermayiyan bi şikilê bikişîne.
Dîtina MP di binê PCXI de di navbera nimûneyan de pir diguhere.(a) MP3, (b) MP4, (c) MP5 û (d) MP6.Hemî wêneyên ku li vir têne xuyang kirin bi magnetek ku bi qasî 10 mm rasterast li jorê kapilarê hatî girtin.Derdorên mezin ên xuya gulikên hewayê ne ku di kapilaran de hatine girtin, bi zelalî taybetmendiyên qeraxên reş û spî yên wêneya berevajiya qonaxê nîşan didin.Qutiya sor mezinkirina ku berevajîyê zêde dike destnîşan dike.Bala xwe bidinê ku di hemî jimareyan de pîvazên dorhêlên magnetîsî ne bi pîvan in û bi qasî 100 carî ji yên ku têne xuyang kirin mezintir in.
Gava ku magnet li ser serê kapîlarê çep û rast digere, goşeya têla MP diguhezîne da ku bi magnetê re li hev were (binihêre Figure 6), bi vî rengî xêzên qada magnetîkî diyar dike.Ji bo MP3-5, piştî ku akord digihîje goşeya bendavê, perçe li ser rûyê jorîn a kapilarê dikişin.Ev bi gelemperî dibe sedema kombûna parlamenteran di nav komên mezin de li nêzî cihê ku qada magnetîkî ya herî bihêz e (binihêrin Vîdyoya Pêvek S3: MP5).Ev di heman demê de bi taybetî dema ku wêneyek nêzî dawiya kapilaran tê xuyang kirin, ku dibe sedem ku MP li navbera şil-hewayê kom bibe û bicive.Parçeyên di MP6-ê de, yên ku ji yên MP3-5-ê dijwartir dihatin cûda kirin, dema ku magnet li ser kapilarê diçû nekişiyan, lê têlên MP-yê ji hev veqetiyan, û pirtik li ber çavan hiştin (binihêrin Vîdyoya Pêvek S4: MP6).Di hin rewşan de, dema ku zeviya magnetîkî ya hatî sepandin bi guheztina magnetê ji cîhê wênekêşiyê dûr û dirêj kêm bû, her parlamenterên mayî hêdî hêdî ji hêla gravîtasyonê ve daketin binê boriyê, di nav rêzê de ma (binêre Vîdyoya Pêvek S5: MP3) .
Gava ku magnet ber bi rastê ve li jora kapilarê diherike, goşeya têla MP diguhere.(a) MP3, (b) MP4, (c) MP5 û (d) MP6.Qutiya sor mezinkirina ku berevajîyê zêde dike destnîşan dike.Ji kerema xwe not bikin ku vîdyoyên pêvek ji bo mebestên agahdarî ne ji ber ku ew avahiya perçeyên girîng û agahdariya dînamîkî ya ku di van wêneyên statîk de nayên xuyang kirin eşkere dikin.
Testên me destnîşan kirin ku guheztina magnetê hêdî hêdî li ser trakeyê di çarçoveya tevgera tevlihev a di vivo de dîtina MF hêsantir dike.Ti testên in vivo nehatin kirin ji ber ku pîvazên polystyrene (MP1 û MP2) di kapilarê de xuya nedibûn.Her yek ji çar MF-yên mayî di vivo de bi oxena dirêj a magnetê ku li ser trakeyê bi goşeyek bi qasî 30 ° berbi vertîkal ve hatî danîn hate ceribandin (binihêrin Figure 2b û 3a), ji ber ku ev yek di encamê de zincîreyên MF-ê dirêjtir bû û bi bandortir bû. ji magnetek..veavakirin qediya.MP3, MP4 û MP6 di trakeya tu heywanên zindî de nehatine dîtin.Dema dîtbarîkirina rêça bêhnê ya mişkan piştî kuştina heywanan bi awayekî mirovî, pîç nedihatin dîtin jî dema ku bi pompeya sirincê volteyek zêde lê zêde kirin.MP5 xwedan naveroka oksîtê ya hesin herî bilind bû û tenê perçeya xuya bû, ji ber vê yekê ew ji bo nirxandin û taybetmendîkirina tevgera MP di vivo de hate bikar anîn.
Bicîhkirina magnetê li ser trakeyê di dema têketina MF de bû sedem ku gelek, lê ne hemî, MF di qada dîtinê de kom bibin.Ketina tracheal ya pirtikan çêtirîn di heywanên ku bi mirovane hatine otoxankirin de têne dîtin.Wêneyê 7 û Vîdyoya Pêvek S6: MP5 girtina magnetîkî ya bilez û lihevhatina perçeyan li ser rûyê trakeya zikê nîşan dide, û destnîşan dike ku parlamenter dikarin li deverên xwestî yên trakeyê bêne armanc kirin.Dema ku piştî radestkirina MF-ê li dirêjahiya trakeyê bêtir dûrî lêgerînê digere, hin MF nêzî kerînê hatin dîtin, ku ev nîşan dide ku hêza zeviya magnetîkî ya têr nake ku hemî MF berhev bike û bigire, ji ber ku ew di dema rêveberiya şilavê de di nav devera herî zêde hêza qada magnetîkî de hatine radest kirin.doz.Lêbelê, hûrgelên MP piştî zayînê li dora qada wêneyê bilindtir bûn, û destnîşan dike ku gelek parlamenter li herêmên hewayê yên ku hêza qada magnetîkî ya herî zêde tê sepandin mane.
Wêneyên (a) berî û (b) piştî radestkirina MP5 di trakeya mişkek ku vê dawîyê de êtanîkirî ye bi magnetek ku li jorê devera wênekirinê hatî danîn.Cihê ku hatî xuyang kirin di navbera du zengilên kartilaginous de ye.Berî ku parlamenter were radestkirin, di rêyên hewayê de hin şilek heye.Qutiya sor mezinkirina ku berevajîyê zêde dike destnîşan dike.Van wêneyan ji vîdyoya ku di S6 de hatî xuyang kirin têne girtin: Vîdyoya Pêvekirî MP5.
Gera magnetê li ser trachea di vivo de bû sedema guherînek di goşeya zincîra MP ya li ser rûyê hewayê de, mîna ya ku di kapîlaran de tê dîtin (binihêre Figure 8 û Vîdyoya Pêvek S7: MP5).Lêbelê, di lêkolîna me de, wekî ku kapilaran dikaribû bikin, parlamenter nekarîn li ser rûyê riyên nefesê yên zindî werin kaş kirin.Di hin rewşan de, dema ku magnet çep û rast dimeşe, zincîra MP dirêj dibe.Tiştê balkêş, me her weha dît ku zincîra parçikê dema ku magnet bi dirêjahî li ser trakeyê diherike kûrahiya qata rûkalê diguhezîne, û dema ku magnet rasterast li ser serê xwe tê guheztin û zincîra perçeyê berbi pozîsyonek vertîkal tê zivirandin, berfireh dibe (binêre Vîdyoya Pêvek S7).: MP5 li 0:09, binê rastê).Nimûneya tevgerê ya taybetmendî guherî dema ku magnet bi alîkî ve li ser serê trakeyê (ango, li çepê an rastê heywanê, ne li dirêjahiya trakeyê) hate guheztin.Parçik di dema tevgera wan de hîn jî bi zelalî xuya dibûn, lê dema ku magnet ji trakeyê hate derxistin, tiliyên xêzên parçikan xuya bûn (binihêrin Vîdyoya Pêvek S8: MP5, di 0:08 de dest pê dike).Ev bi tevgera dîtbarî ya qada magnetîkî ya di bin çalakiya zeviyek magnetîkî ya sepandî de di kapileyek camê de razî ye.
Wêneyên nimûne ku MP5 di trakeya mişkek zindî ya bêhestkirî de nîşan dide.(a) magnet ji bo bidestxistina wêneyên li jor û çepê trakeyê tê bikar anîn, paşê (b) piştî ku magnetê ber bi rastê ve bikişîne.Qutiya sor mezinkirina ku berevajîyê zêde dike destnîşan dike.Van wêneyan ji vîdyoya ku di Vîdyoya Pêvek a S7 de hatî destnîşan kirin: MP5 ne.
Dema ku her du stûn li jor û jêrê trakeyê di arasteyekî bakur-başûr de hatin xêzkirin (ango, dikişand; Xiflteya 3b), akordên MP dirêjtir xuya dibûn û li ser dîwarê alî yê trakeyê ne li ser rûyê piştê yê trakeyê bûn. trachea (li Pêvek binêre).Vîdyo S9: MP5).Lêbelê, tansiyonên zêde yên parçikan li yek cîhê (ango, rûbera pişta trakeyê) piştî rêveberiya şilavê bi karanîna amûrek magnetîkî ya dualî, ku bi gelemperî bi amûrek magnetîkî ya yekane çêdibe, nehat dîtin.Dûv re, gava ku magnetek hate mîheng kirin da ku polên dijber paşde bikişîne (Wêne 3c), piştî radestkirinê hejmara keriyên ku di qada dîtinê de xuya dibin zêde nebû.Sazkirina her du konfigurasyonên magnetîkî dijwar e ji ber hêza qada magnetîkî ya bilind ku bi rêzê magnetan dikişîne an dikişîne.Dûv re sazûman hate guheztin bo magnetek yekane ku bi riyên hewayê re paralel lê di rêyên hewayê re bi goşeyek 90 pileyî re derbas dibe, ji ber vê yekê xêzên hêzê bi rengek ortogonal dîwarê trachealê derbas kirin (Wêne 3d), rêgezek ku tê armanc kirin ku îhtîmala kombûna perçeyan diyar bike. dîwarê alî.were dîtin.Lêbelê, di vê veavakirinê de, tevgera berhevkirina MF an tevgera magnetîkî ya naskirî tune bû.Li ser bingeha van hemî encaman, vesazkirinek bi magnetek yekane û rêgezek 30-pileyî ji bo lêkolînên in vivo yên hilgirên genê hate hilbijartin (Wêne. 3a).
Gava ku heywan di cih de piştî ku bi awayekî mirovî hate qurbankirin, gelek caran hate wêne kirin, nebûna tevgera tevnvîsê ya destwerdanê tê vê wateyê ku di qada zelal a navkartilaginous de xêzên perçeyên hûrtir û kurttir têne xuyang kirin, ku li gorî tevgera wergerî ya magnetê 'livînin'.hebûn û tevgera pariyên MP6 bi zelalî dibînin.
Tîtra LV-LacZ 1,8 x 108 IU/mL bû, û piştî tevlihevkirina 1:1 bi CombiMag MP (MP6), heywanan bi 50 μl dozek trakeal a 9 x 107 IU/ml ji wesayîta LV (ango 4,5). x 106 TU/rat).).).Di van lêkolînan de, li şûna ku em magnetê di dema kedê de biguhezînin, me magnet di yek pozîsyonê de rast kir da ku diyar bikin ka veguheztina LV dikare (a) li gorî radestkirina vektorê di nebûna zeviyek magnetîkî de were çêtir kirin, û (b) ger riya hewayê dikare were çêtir kirin. baldar be.Hucreyên ku di nav deverên hedefa magnetîkî yên rêka nefesê ya jorîn de têne veguheztin.
Hebûna magnet û karanîna CombiMag bi hevberdana vektorên LV re xuya nedikir ku bandorek neyînî li tenduristiya heywanan dike, wekî protokola meya standard radestkirina vektora LV.Wêneyên pêşiyê yên herêma trachealê ku di bin tevliheviya mekanîkî de ye (Hêjêra pêvek. 1) destnîşan kir ku koma dermankirî ya LV-MP di hebûna magnetek de astên veguheztinê pir bilindtir bû (Hêl. 9a).Di koma kontrolê de tenê piçûkek piçûk a rengkirina LacZ şîn hebû (Wêne 9b).Pîvankirina herêmên normalîzekirî yên X-Gal-rengkirî destnîşan kir ku rêvebirina LV-MP di hebûna zeviyek magnetîkî de bi qasî 6-qatî çêtirbûnek encam dide (Wêne. 9c).
Mînaka wêneyên pêkhatî ku veguheztina tracheal bi LV-MP (a) di hebûna zeviyek magnetîkî de û (b) di nebûna magnetek de nîşan dide.(c) Pêşveçûnek girîng a statîstîkî li devera normalîzekirî ya veguheztina LacZ di trachea de bi karanîna magnetek (*p = 0,029, t-test, n = 3 ji bo komê, navîn ± xeletiya standard a navîn).
Beşên bi lez û bez ên sor ên bêalî (nimûneya ku di xêza Pêvek. 2 de tê xuyang kirin) destnîşan kir ku şaneyên bi LacZ-renggirtî di heman nimûneyê de û li heman cîhê ku berê hatî ragihandin hene.
Pirsgirêka sereke ya di tedawiya genê ya hewayê de cihgirtina rastîn a perçeyên hilgirê li deverên balkêş û bidestxistina astek bilind a kargêriya veguheztinê di pişika mobîl de di hebûna herikîna hewayê û paqijkirina mîzê ya çalak de dimîne.Ji bo hilgirên LV-ê yên ku ji bo dermankirina nexweşiyên respirasyonê yên di fibroza kîstîk de têne armanc kirin, zêdekirina dema rûniştinê ya pariyên hilgirê di rêyên hewayê yên gerîdok de heya nuha armancek negihîştî bû.Wekî ku ji hêla Castellani et al. ve hatî destnîşan kirin, karanîna zeviyên magnetîkî ji bo zêdekirina veguheztinê li ser rêbazên radestkirina genê yên wekî elektroporasyonê feydeyên xwe hene ji ber ku ew dikare sadebûn, aborî, radestkirina herêmî, zêdekirina karîgeriyê, û dema înkubasyonê kurttir bi hev re bike.û dibe ku dozek kêmtir wesayît10.Lêbelê, di vivo de rûxandin û tevgera keriyên magnetîkî yên di rêyên hewayê de di bin bandora hêzên magnetîkî yên derveyî de çu carî nehatiye vegotin, û di rastiyê de şiyana vê rêbazê ji bo zêdekirina asta vegotina genê di rêyên hewayê yên saxlem de di vivo de nehatiye xuyang kirin.
Ceribandinên me yên in vitro yên li ser senkrotrorona PCXI destnîşan kirin ku hemî perçeyên ku me ceribandin, ji bilî MP polystyrene, di sazkirina wênekêşiya ku me bikar anî de xuya bûn.Li ber hebûna qadeke magnetîsî, qadên magnetîkî têlan çêdikin, dirêjiya wan bi cureya keriyan û hêza qada magnetîkî ve girêdayî ye (ango nêzîkbûn û tevgera magnetîkê).Wekî ku di Figure 10-ê de tê xuyang kirin, rêzikên ku em temaşe dikin têne çêkirin dema ku her perçeyek ferdî magnetîze dibe û qada xweya magnetîkî ya herêmî çêdike.Van zeviyên cihêreng dibin sedem ku perçeyên din ên mîna hev ji ber hêzên herêmî yên ji hêzên herêmî yên balkêş û paşvekêşana pariyên din kom bibin û bi tevgerên têl komê re têkildar bibin.
Diagrama ku (a, b) zincîreyên perçeyên ku di hundurê kapilaran dagirtî de çêdibin û (c, d) trakeya dagirtî ya hewayê nîşan dide.Bala xwe bidinê ku kapilar û trachea li ser pîvanê nayên kişandin.Panela (a) di heman demê de danasîna MF-ya ku di nav zincîran de hatine rêz kirin pariyên Fe3O4 vedihewîne.
Dema ku magnet di ser kapilarê re diçû, goşeya xêza pirtikê digihîje sînorê krîtîk ji bo MP3-5 ku Fe3O4 tê de ye, piştî wê xêza pirtikê êdî di pozîsyona xweya orjînal de namîne, lê li ser rûxê berbi pozîsyonek nû ve diçe.meknetîs.Dibe ku ev bandor çêbibe ji ber ku rûyê kapîlara camê têra xwe xweş e ku dihêle ku ev tevger çêbibe.Balkêş e, MP6 (CombiMag) bi vî rengî tevnegeriya, dibe ku ji ber ku pirtik piçûktir bûn, xwedan pêçek an barek rûyê cûda bû, an jî şilava hilgirê xwedan bandor li şiyana wan a tevgerê kir.Berevajî di wêneya parçikên CombiMag de jî qelstir e, û destnîşan dike ku dibe ku şilek û parçik xwedî heman tîrêjê bin û ji ber vê yekê nikanin bi hêsanî ber bi hev ve biçin.Di heman demê de pirtik jî dikarin zeliqandî bibin ger magnetik pir zû bimeşe, ev destnîşan dike ku hêza qada magnetîkî her gav nikare têkçûna di navbera perçeyên di şilavê de derbas bike, pêşniyar dike ku hêza zeviya magnetîkî û dûrahiya di navbera magnet û devera armanc de ne wekî hev be. nişkeva şakirin.giring.Van encaman her weha destnîşan dikin ku her çend magnet dikarin gelek mîkroparçeyên ku di nav devera armancê de diherikin bigirin jî, ne mimkûn e ku ji magnetan re were bawer kirin ku pariyên CombiMag li ser rûyê trakeyê biguhezînin.Bi vî rengî, me encam da ku lêkolînên di vivo LV MF de pêdivî ye ku zeviyên magnetîkî yên statîk bikar bînin da ku bi fîzîkî deverên taybetî yên dara hewayê hedef bikin.
Gava ku parçik di laş de têne radest kirin, di çarçoweya tevna tevhev a tevlihev a laş de naskirina wan dijwar e, lê kapasîteya wan a tespîtkirinê bi guheztina magnetê bi horizontî li ser trakeyê çêtir bûye da ku tîrêjên MP-yê "bihejîne".Dema ku wênekêşiya di wextê rast de mimkun e, piştî ku heywan bi însanî hat kuştin, hêsantir e ku meriv tevgera perçeyan nas bike.Dema ku magnet li ser devera wênekêşiyê hate danîn, bi gelemperî li vê deverê hûrgelên MP-yê herî zêde bûn, her çend hin perçe bi gelemperî li binê trakeyê bêtir têne dîtin.Berevajî lêkolînên in vitro, pirtik bi tevgera magnetîkê nayên kaş kirin li trakeyê.Ev vedîtin bi vê yekê re hevaheng e ku çawa mukusa ku rûyê trakeyê vedigire bi gelemperî perçeyên nehskirî pêvajoyê dike, wan di nav mûkê de digire û dûv re wan bi mekanîzmaya paqijkirina muco-ciliary paqij dike.
Me hîpotez kir ku bikaranîna magnetên li jor û jêrê trakeyê ji bo kişandinê (Hêjîrê. 3b) dikare bibe sedemek zevîyek magnetîkî ya yekrengtir, li şûna zevîyek magnetîkî ya ku li yek xalê pir komkirî ye, ku dibe sedema belavbûna yekrengtir a pirçan..Lêbelê, lêkolîna me ya pêşîn delîlek zelal nedît ku vê hîpotezê piştgirî bike.Bi heman awayî, danîna cotek magnetan ji bo paşvekişandinê (Hêjîrê. 3c) encam neda ku bêtir perçeyên li qada wêneyê rûnin.Van her du vedîtinan destnîşan dikin ku sazkirina du-magnetê bi girîngî kontrola herêmî ya nîşankirina MP-ê çêtir nake, û ku hêzên magnetîkî yên bihêz ên ku têne peyda kirin dijwar e, ku ev nêzîkatî kêm pratîk dike.Bi heman awayî, arastekirina magneta li jor û li seranserê trakeyê (Wêne 3d) di heman demê de hejmara keriyên ku li qada wênekirî mane zêde nekir.Dibe ku hin ji van veavakirinên alternatîf ne serketî bin ji ber ku ew dibin sedema kêmbûna hêza zeviya magnetîkî ya li devera hilweşandinê.Bi vî rengî, veavakirina magnetîkî ya yekane li 30 dereceyan (Hêjîrê. 3a) rêbaza ceribandina vivo ya herî hêsan û bikêr tê hesibandin.
Lêkolîna LV-MP destnîşan kir ku dema ku vektorên LV bi CombiMag re hatin berhev kirin û piştî ku di hebûna zeviyek magnetîkî de ji hêla laşî ve hatin xerakirin, asta veguheztinê li gorî kontrolê di trachea de pir zêde zêde bû.Li ser bingeha lêkolînên wênekêşiya synchrotron û encamên LacZ, xuya bû ku qada magnetîkî dikare LV-ê di trachea de bihêle û hejmara pariyên vektorî yên ku tavilê ketine kûrahiya pişikê kêm bike.Pêşveçûnên bi vî rengî yên armancgirtinê dikarin di heman demê de kêmkirina titerên radestkirî, veguheztina ne-armanc, bandorên alîgirê înflamatuar û belengaz, û lêçûnên veguheztina genê bibe sedema karbidestiya bilind.Ya girîng, li gorî hilberîner, CombiMag dikare bi rêgezên veguheztina genê yên din re, tevî vektorên din ên vîrus (wek AAV) û asîdên nukleîk, were bikar anîn.